Worthington脫氧核糖核酸酶I特異性和相關(guān)研究
脫氧核糖核酸酶Ⅰ是一種核酸內(nèi)切酶,zui早由M.Kunitz結(jié)晶的所得。離子的存在對(duì)切斷方式有著明顯的影響。在不斷的研究發(fā)展過程中,也被作為一種研究材料。
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脫氧核糖核酸酶Ⅰ是最有代表性的核酸內(nèi)切酶。最早是由M.Kunitz從胰臟中分離出結(jié)晶的,也稱為胰脫氧核糖核酸酶或DNaseⅠ,?EC3.1.21.1。分子量約3.1萬,等電點(diǎn)pH4.7,最適PH 7附近,需要Mg2?和Mn2?。分離單鏈和雙鏈DNA,產(chǎn)生具有?5′-磷酸末端的分解物。在一般條件下其分解產(chǎn)物含有1到8—12個(gè)寡聚核苷酸,平均大小等于四個(gè)核苷酸。反應(yīng)初期似乎是先分解dpPupPy鍵,但因二價(jià)離子的存在對(duì)切斷的方式有顯著影響。因此酶容易得到結(jié)晶,所以于核酸 ?的研究上廣泛應(yīng)用;又由于對(duì)整個(gè)結(jié)構(gòu)已經(jīng)明確,因而也是酶化學(xué)研究的材料。
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艾美捷Worthington脫氧核糖核酸酶I特異性:
bpDNase I?不是堿基或序列特異性的;但是,它不會(huì)隨機(jī)切割。它顯示優(yōu)先在嘧啶的?5'?側(cè)進(jìn)行裂解,并且在替代共聚物中尤其明顯(Bernardi?等人?1975?和?Lomonossoff?等人?1981)。已經(jīng)表明,扭曲角的變化被?DNase I?識(shí)別(Dickerson?和?Drew 1981)。DNase I?的特異性還取決于存在的二價(jià)陽離子。在存在?Ca2+?和?Mg2+?的情況下,它會(huì)導(dǎo)致單鏈斷裂,而在存在?Mn2+?的情況下會(huì)導(dǎo)致雙鏈斷裂(Junowicz?和?Spencer 1973,以及?Campbell?和?Jackson 1980)。
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艾美捷Worthington脫氧核糖核酸酶I分子特征:
與人類、小鼠和大鼠類似,牛胰腺?DNase I?基因由?9?個(gè)外顯子組成,只有最后?8?個(gè)外顯子編碼該蛋白質(zhì)(De María?和?Arruti 2003)。新生蛋白通過由外顯子二編碼的?22?個(gè)氨基酸信號(hào)序列引導(dǎo)至分泌途徑細(xì)胞器。主要活性位點(diǎn)殘基?H166?由外顯子?6?編碼(De María?和?Arruti 2003?和?Kraehenbuhl?等人?1977)。盡管牛和其他哺乳動(dòng)物的外顯子長度幾乎相同,但內(nèi)含子的長度差異很大。TATA?盒序列位于外顯子?I?上游?35 bp(De María?和?Arruti 2003)。已經(jīng)提出影響編碼序列的多重剪接事件可能是下調(diào)?DNase I?表達(dá)的機(jī)制(Liu?等人?1997)。
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脫氧核糖核酸酶I相關(guān)研究:
肌動(dòng)蛋白
白蛋白,無核酸酶
脫氧核糖核酸酶?II
脫氧核糖核酸及相關(guān)產(chǎn)品
組蛋白
溶菌酶
核酸酶,微球菌
核酸酶,S1
磷酸酶,堿性
磷酸二酯酶?I
磷酸二酯酶?II
蛋白酶K
逆轉(zhuǎn)錄酶,重組?HIV
核糖核酸酶A
核糖核酸酶?T1
核糖核酸酶,E-Rase? RNase?混合物
核糖核酸