1、培養(yǎng)基的配制注意事項(xiàng)

植物組織培養(yǎng)最常用到 MS 培養(yǎng)基，包含十幾種化合物。因?yàn)橛行┗衔锵嘤鰰?huì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生沉淀，影響培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分，所以準(zhǔn)備 MS 培養(yǎng)基需要配制多種高倍母液。配制母液時(shí)，尤其涉及大量元素的母液時(shí)，一定要等一種成分溶解之后，再緩慢的添加另一種成分。切記“一鍋煮”，即不能將各種化合物一齊添加進(jìn)去。

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2、滅菌后培養(yǎng)基不凝膠或者凝膠偏軟

植物凝膠、瓊脂都對(duì)酸性條件敏感，pH 值低于 5 很難成膠或凝膠偏軟，切記高壓滅菌前調(diào)節(jié)培養(yǎng)基 pH 值（5.5 - 6.0）。植物凝膠對(duì)二價(jià)陽(yáng)離子濃度有要求，也就是相對(duì)于 MS 培養(yǎng)基，1 / 2 MS 培養(yǎng)基中植物凝膠要適當(dāng)增加用量。另外滅菌后，倒出培養(yǎng)基前一定將培養(yǎng)基搖勻（帶防燙手套），因?yàn)榄傊芏却蟮讓雍扛?，容易造成培養(yǎng)基強(qiáng)度不均勻。

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3、水解酪蛋白有酸水解和酶水解之分，在使用過(guò)程中有何區(qū)別？

水解酪蛋白對(duì)胚狀體、不定芽的分化有良好的促進(jìn)作用，通常用量在?500 mg/L，不管是酸解還是酶解，作用都是一樣的，酶解更有利于發(fā)揮其作用。

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4、如何溶解組培常用植物激素？

IAA、IBA、GA、玉米素、多效唑等應(yīng)先溶解于少量?95% 的乙醇中，再加水定容配制成母液。如有結(jié)晶析出，可考慮用 1 / 10 體積的乙醇溶解后再定容；2，4 -D 易溶于堿性水溶液，可用少量 1mol/L 的 NaOH 溶液溶解后再慢慢加水定容；KT 和 6 -BA 先用少量的 HCL 溶解，再加水定容到一定的濃度。

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5、細(xì)胞分裂素的使用濃度

一般情況下在培養(yǎng)基中加入?0.1～10.0 mg/L 的細(xì)胞分裂素（6 -BA/KT/ZT)，多數(shù)用?1.0～2.0 mg/L；KT 濃度為 0.5～2 mg/L，此數(shù)據(jù)也要根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料來(lái)調(diào)整。細(xì)胞分裂素可以單獨(dú)使用也可以與細(xì)胞生長(zhǎng)素配合使用。

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6、哪些植物激素能高壓滅菌，哪些不能高壓滅菌？

IBA、NAA、6 -BA、2,4 -D 可高溫高壓滅菌。IAA、GA3、茉莉酸等不可高溫高壓滅菌，否則會(huì)分解失效。該類植物激素配制母液后需用?0.22ul?微孔濾膜過(guò)濾除菌，待培養(yǎng)基冷卻（50 - 60℃）后尚未凝膠前加入混勻。

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7、培養(yǎng)基的?pH 值對(duì)凝膠硬度有無(wú)影響？

有影響。若將培養(yǎng)基?pH 值調(diào)的過(guò)高（大于 6），則培養(yǎng)基偏硬，增加接種的阻力，會(huì)對(duì)外植體造成損傷。若將培養(yǎng)基 pH 值調(diào)的過(guò)低（小于 4.5），則培養(yǎng)基不能凝固，起不到固定外植體的作用。一般將培養(yǎng)基的 pH 調(diào)節(jié)至 5.5～6.0 為宜。

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8、滅菌過(guò)程是否影響培養(yǎng)基的?pH 值？

培養(yǎng)基中的蔗糖和激素在高溫滅菌過(guò)程中容易酸化，培養(yǎng)基?pH 值滅菌后會(huì)有所下降，滅菌前培養(yǎng)基的 pH 值偏低可能導(dǎo)致培養(yǎng)基不凝或偏軟。要求偏酸性的培養(yǎng)基可適當(dāng)增加瓊脂或植物凝膠的用量。

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9、?用75%的酒精進(jìn)行種子消毒需要注意的問(wèn)題

種子在消毒過(guò)程中使用75%的酒精應(yīng)慎重，酒精滲透力極強(qiáng)，消毒時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)直接影響種子發(fā)芽率，所以消毒時(shí)間不應(yīng)超過(guò) 1 min。

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10、原始繁殖材料的消毒

組培生產(chǎn)中，作為原始繁殖材料的外植體消毒直接影響整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程的進(jìn)行。從室外采回來(lái)的外植體需要進(jìn)行消毒，首先用自來(lái)水沖洗外植體，沖洗時(shí)間可根據(jù)采集部位不同而定，一般在?5～15 分鐘即可；在超凈臺(tái)中進(jìn)行藥劑的處理是關(guān)鍵，常用的藥劑處理有70%的乙醇溶液、9%的次氯酸鈉溶液和0.1～0.2%的升汞溶液，具體可根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料而定。但要注意的是經(jīng)生汞滅菌的外植體必須用無(wú)菌水沖洗?6～8 次。

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11、應(yīng)對(duì)植物組織培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)的污染

植物組織培養(yǎng)過(guò)程中的污染來(lái)源主要分為?三種：真菌、細(xì)菌、組織培養(yǎng)過(guò)程中的污染源。在操作過(guò)程中，難免有菌落入培養(yǎng)基或植物材料上，而導(dǎo)致污染。另外，不正確操作也會(huì)增加污染幾率。

預(yù)防措施：通風(fēng)，保持室內(nèi)空氣干燥，紫外殺菌等；污染物品和污染培養(yǎng)基不要在培養(yǎng)室近距離開(kāi)瓶洗刷。

污染原因

培養(yǎng)基污染?：若污染菌類是零星分散在培養(yǎng)基中，則可確定是人為引起的污染。比如：培養(yǎng)基滅菌不徹底，開(kāi)瓶時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，滅菌后存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等；高溫蒸汽滅菌器的溫度、壓力、時(shí)間沒(méi)有正確設(shè)置；滅菌過(guò)程中濾膜孔徑選擇、過(guò)濾滅菌器的滅菌處理、過(guò)濾滅菌操作等。

這些均會(huì)影響培養(yǎng)基的滅菌效果。

措施：嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)要求，滅菌規(guī)程操作。

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外植體污染?：若污染菌類是從材料周?chē)L(zhǎng)起，且發(fā)生在?5 天以后，則說(shuō)明是材料帶的內(nèi)生菌?？赡苁墙臃N用具滅菌不徹底，接種時(shí)材料被污染；若從培養(yǎng)基以下開(kāi)始長(zhǎng)菌，發(fā)生時(shí)間較早，且有從里向外的趨勢(shì)，則說(shuō)明是切口引起的污染，原因可能是未剪去兩個(gè)切口或者雖剪去切口但是所用器具帶菌；或者是未及時(shí)發(fā)現(xiàn)污染苗，接種過(guò)程中引起交叉污染；

措施：取材時(shí)應(yīng)仔細(xì)選擇，以減少污染的發(fā)生。

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操作環(huán)節(jié)污染?：接種室是否清潔、干燥、密封，是否經(jīng)常用紫外燈照射、甲醛熏蒸、70% 的酒精噴霧殺菌等；超凈工作臺(tái)擺放物品雜亂，長(zhǎng)時(shí)間不換濾網(wǎng)，導(dǎo)致凈化能力降低；接種用具滅菌不徹底引起污染；操作不正確等。

措施：每次接種前半個(gè)小時(shí)，用20%的新潔爾擦洗室內(nèi)設(shè)備、工作臺(tái)面，再用紫外燈照射20 min。還可以噴灑70%的乙醇進(jìn)行消毒。除了培養(yǎng)基、接種材料、器具和用具保證無(wú)菌外，同時(shí)在接種時(shí)還需要嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作。

真菌污染后，如果已形成孢子，則必須經(jīng)高壓滅菌后扔掉；若是細(xì)菌污染，只要及時(shí)發(fā)現(xiàn)，將材料上部未感染菌的部分剪下轉(zhuǎn)接，材料仍可以用。

用抗生素等殺菌藥劑處理。至今還未發(fā)現(xiàn)哪種抗生素能夠?qū)Ω鞣N菌都有效，并且抗生素也會(huì)影響植物材料的正常生長(zhǎng)分化。一些藥劑，雖有的殺菌效果好，但往往容易引起鹽害，也無(wú)法利用。

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12、外植體的選擇

為了使接種后的誘導(dǎo)得以成功，選的外植體應(yīng)該是幼嫩的，處于生長(zhǎng)旺盛時(shí)期的，并且外植體的體積不能過(guò)小，如若過(guò)小則會(huì)影響愈傷組織的形成，從而影響進(jìn)一步的分化。因此，一般接種的外植體體積在?0.5～1.0 cm2 的范圍內(nèi)即可。最適的為莖尖、帶芽莖段，也可以利用葉子、子葉、根段、花器官組織等。

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13、植物莖段組織培養(yǎng)需要注意哪些問(wèn)題

以莖段進(jìn)行組織培養(yǎng)比較容易，一般取植物的嫩莖切段作為外植體，切成?0.5～1 cm 長(zhǎng)的小段進(jìn)行接種，保證每個(gè)莖段有一個(gè)芽點(diǎn)和一片葉子，將芽點(diǎn)部位以下垂直插入培養(yǎng)基凝膠中進(jìn)行生根培養(yǎng)。

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14、外植體接種需要注意的操作事項(xiàng)

接種前首先進(jìn)行滅菌消毒，接種所用的鑷子、解剖刀、剪刀等工具需要提前高溫高壓滅菌，提前20分鐘打開(kāi)超凈工作臺(tái)，紫外燈滅菌15～20min，操作人員要用 75% 的酒精擦手、工作臺(tái)和器皿、解剖刀和鑷子等，并擦酒精灼燒晾涼后備用。在無(wú)菌培養(yǎng)皿中或?yàn)V紙上切割外植體，接種到培養(yǎng)基表面，瓶口傾斜接近酒精燈火焰。

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15、組織培養(yǎng)中材料褐化現(xiàn)象

不同品種以及生理狀態(tài)引起的褐化狀態(tài)不同。培養(yǎng)基過(guò)高濃度的無(wú)機(jī)鹽及細(xì)胞分裂素會(huì)使褐化現(xiàn)象加重。培養(yǎng)條件不當(dāng)，例如光照過(guò)強(qiáng)、溫度過(guò)高、培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等，均可使多酚氧化酶的活性提高，從而加重外植體的褐變程度。

防治措施：

選擇合適的外植體：處于生長(zhǎng)旺盛的外植體，可以使褐變現(xiàn)象明顯減輕。合適的培養(yǎng)條件、無(wú)機(jī)鹽成分、植物生長(zhǎng)物質(zhì)水平、適宜溫度、及時(shí)繼代培養(yǎng)均可以減輕材料的褐變現(xiàn)象。

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使用抗氧化劑：在培養(yǎng)基中使用半胱氨酸、抗壞血酸、PVP 等抗氧化劑能夠較為有效地避免或減輕很多外植體的褐變現(xiàn)象。使用 0.1%～0.5% 的活性炭對(duì)防止褐變也有較為明顯的效果。

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連續(xù)轉(zhuǎn)移：對(duì)容易褐變的材料可間隔12～24小時(shí)培養(yǎng)后，再轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上，這樣經(jīng)過(guò)連續(xù)處理7～10天后，褐變現(xiàn)象便會(huì)得到控制或大為減輕。

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16、?材料玻璃化問(wèn)題

植物材料不斷進(jìn)行離體繁殖時(shí)，有些培養(yǎng)物的嫩莖、葉片往往會(huì)呈半透明狀、水跡狀，這種現(xiàn)象通常稱為玻璃化。玻璃化是試管苗的生理失調(diào)癥，試管苗生長(zhǎng)緩慢、玻璃化的嫩莖不宜誘導(dǎo)生根，繁殖系數(shù)有所下降。當(dāng)培養(yǎng)基上細(xì)胞分裂素水平較高時(shí)，容易出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。

愈傷組織的玻璃化問(wèn)題主要表現(xiàn)在培養(yǎng)過(guò)程中愈傷組織松散，脆易碎。葉子或是長(zhǎng)出的愈傷，一段時(shí)間后在其周?chē)霈F(xiàn)水漬化，繼而影響整個(gè)培養(yǎng)基。

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防治措施：在培養(yǎng)基中添加少量聚乙烯醇、脫落酸等物質(zhì)，降低培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素含量及含氮化合物的用量，選用低?NH4 +水平的 B5 培養(yǎng)基，都能夠在一定程度上減輕玻璃化的現(xiàn)象發(fā)生；增加光照，對(duì)減輕試管苗玻璃化的現(xiàn)象有明顯的作用；在培養(yǎng)基中添加活性炭、馬鈴薯汁、間苯三酚等可有效的減輕和防止玻璃化。

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17、材料水浸狀、變色、壞死、莖斷面附近干枯

可能原因：表面殺菌劑過(guò)量，消毒時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，外植體選用不當(dāng)（部位或時(shí)期）。

改進(jìn)措施：調(diào)換其他殺菌劑或降低濃度，縮短消毒時(shí)間，試用其他部位，生長(zhǎng)初期取材。

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18、材料長(zhǎng)期培養(yǎng)幾乎無(wú)反應(yīng)

可能原因：培養(yǎng)基不適合，生長(zhǎng)素的選擇和用量不當(dāng)；植物激素對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育和生理過(guò)程的調(diào)節(jié)作用，往往不是某一種植物激素的單獨(dú)效果。環(huán)境溫度不適宜。

改進(jìn)措施：更換培養(yǎng)基或調(diào)整培養(yǎng)基成分，尤其是調(diào)整鹽離子濃度；調(diào)整激素的種類與配比，增加生長(zhǎng)素用量。例如使用人工合成的生長(zhǎng)素類似物?2，4 -D 等可有效促進(jìn)細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng)，新器官的分化和形成；調(diào)整培養(yǎng)溫度等環(huán)境條件。

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19、愈傷組織生長(zhǎng)過(guò)旺疏松

可能原因：由于培養(yǎng)基中激素添加過(guò)量，培養(yǎng)室溫度偏高，礦物質(zhì)等無(wú)機(jī)鹽含量不當(dāng)?shù)纫蛩匾鸬摹?/p>

改進(jìn)措施：根據(jù)不同的品種、不同組織、不同器官，應(yīng)適當(dāng)減少激素用量，適當(dāng)降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整無(wú)機(jī)鹽（尤其是銨鹽）含量，適當(dāng)提高瓊脂用量增加培養(yǎng)基硬度，避免愈傷組織生長(zhǎng)過(guò)旺和疏松現(xiàn)象發(fā)生。

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20、愈傷組織生長(zhǎng)緩慢太緊密

可能原因：細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的用量過(guò)多，糖濃度過(guò)高。

改進(jìn)措施：減少細(xì)胞分裂素用量，調(diào)整細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素比例，降低糖濃度。

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21、愈傷組織分化率低，畸形；分化出的芽多為葉狀芽或叢芽；芽生長(zhǎng)困難，不易成苗。培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)時(shí)，再次愈傷組織化。

可能原因：生長(zhǎng)素用量偏高，溫度偏高。

改進(jìn)措施：減少生長(zhǎng)素用量，可以通過(guò)分化培養(yǎng)時(shí)在培養(yǎng)基中添加?GA3（濃度在 0.5～2 mg/L之間）解決，并適當(dāng)降低愈傷組織的培養(yǎng)溫度。

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22、叢生苗過(guò)于細(xì)弱，不適于生根或移栽

可能原因：細(xì)胞分裂素濃度過(guò)高或赤霉素使用不當(dāng)，產(chǎn)生過(guò)多的不定芽；溫度過(guò)高，光照短，光強(qiáng)不足；不及時(shí)的轉(zhuǎn)移和分切，生長(zhǎng)空間小。

改進(jìn)措施：減少細(xì)胞分裂素用量，免用赤霉素；延長(zhǎng)光照時(shí)間，增強(qiáng)光照；及時(shí)轉(zhuǎn)接；降低接種密度；更換透氣的封口膜等。

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23、組織培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)黃化

引起原因：培養(yǎng)基中?Fe 的含量不足，各種礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不均衡；培養(yǎng)環(huán)境通氣不良，瓶?jī)?nèi)有害氣體積累（乙烯、氨氣、甲醛）等會(huì)引起植物材料黃化脫落；激素配比不當(dāng)；糖用量不足或長(zhǎng)時(shí)間不轉(zhuǎn)移；pH 值變化過(guò)大；培養(yǎng)溫度不適；光照不足等。

改進(jìn)措施：改善組培條件，在配制培養(yǎng)基過(guò)程中檢查儀器設(shè)備是否準(zhǔn)確；降低組培苗的接種密度，及時(shí)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)物；使用透氣的封口膜改善瓶?jī)?nèi)通氣狀況；適當(dāng)調(diào)節(jié)pH值、激素配比和無(wú)機(jī)鹽濃度；控制培養(yǎng)室內(nèi)溫度，適當(dāng)增加光照。

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24、組培培養(yǎng)基都有哪些？

MS 培養(yǎng)基：1962年穆拉辛格和斯庫(kù)格為煙草細(xì)胞培養(yǎng)而設(shè)計(jì)，其中硝酸鹽的濃度高，適合植物原生質(zhì)體、細(xì)胞和組織培養(yǎng)。

B5培養(yǎng)基：1968 年甘伯爾格為大豆細(xì)胞培養(yǎng)而設(shè)計(jì)，銨的濃度低。適合木本植物的組織和細(xì)胞培養(yǎng)。

富鹽平衡培養(yǎng)基：是目前使用最廣泛的一類。特點(diǎn)是：無(wú)機(jī)鹽濃度高，微量元素種類齊全，濃度高；元素間比例適當(dāng)，離子平衡性好，具有較強(qiáng)的緩沖能力、穩(wěn)定性好、營(yíng)養(yǎng)豐富，一般培養(yǎng)時(shí)無(wú)需再加入有機(jī)成分。

高硝態(tài)氮培養(yǎng)基：代表性培養(yǎng)基有?B5、N6、SH。特點(diǎn)是：硝酸鉀濃度高，氨態(tài)氮濃度低，含有較高濃度的硫胺素（VB1）。

中鹽培養(yǎng)基：大多是在?MS 培養(yǎng)基基礎(chǔ)上進(jìn)行改良設(shè)計(jì)。特點(diǎn)是：大量元素?zé)o機(jī)鹽為 MS 的一半，微量元素種類減少、含量增高。維生素種類比 MS 增多，例如增加了生物素、葉酸等。

低鹽培養(yǎng)基：無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)成分含量濃度低，多用作生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

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25、木本植物（油料植物）組織培養(yǎng)中遇到再生苗無(wú)法生根時(shí)怎么辦？

一般常用的1 / 2MS或者1 / 2WPM基本能夠滿足。如果增殖用的基本都生產(chǎn)正常，到生根的時(shí)候出現(xiàn)落葉，只能通過(guò)排除法一樣樣分析。首先看是不是培養(yǎng)溫度太高，使用瓶蓋后透氣性差，導(dǎo)致乙烯積累。其次，可以適當(dāng)添加少量分裂素，或者更換生長(zhǎng)素，以及多種生長(zhǎng)素混合使用。

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26、培養(yǎng)基中添加糖類作為碳源物質(zhì)，有何作用？

碳源為植物細(xì)胞提供能量來(lái)源，蔗糖較葡萄糖能更好地調(diào)節(jié)培養(yǎng)基內(nèi)的滲透壓。微生物生長(zhǎng)所需的碳源最常用的是葡萄糖，采用蔗糖作為培養(yǎng)基的碳源，可一定程度上減少微生物的污染。生長(zhǎng)素和蔗糖濃度決定愈傷組織中維管束的類型與數(shù)量。

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27、植物原生質(zhì)體制備的材料及常用的滲透壓調(diào)節(jié)劑

植物原生質(zhì)體的材料需要選取生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞，幼嫩的組織。無(wú)菌試管苗的葉片、胚軸及子葉、花藥，以及愈傷組織（懸浮細(xì)胞）等。

常用的調(diào)節(jié)原生質(zhì)體滲透壓的穩(wěn)定劑主要有甘露醇、山梨醇、葡萄糖、蔗糖等。滲透壓濃度一般為0.3～0.8mol/L。

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28、組培苗移栽需要注意的問(wèn)題

移栽前打開(kāi)組培瓶的封口膜，煉苗3～5d后取出小苗，用流水洗凈根部的培養(yǎng)基，然后移栽到盛有滅過(guò)菌的蛭石的營(yíng)養(yǎng)缽中過(guò)度一下，但不可直接向營(yíng)養(yǎng)缽中澆營(yíng)養(yǎng)液（容易長(zhǎng)菌），用透明的塑料薄膜罩住小苗3～5d后移栽到土里。

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29、光照強(qiáng)度是如何計(jì)算的

光照強(qiáng)度=光通量/單位面積。Lux的換算比較抽象，一般以燭光為計(jì)算單位。以現(xiàn)在所用的電源發(fā)光的光源，記作國(guó)際燭光，即25瓦特的電燈其光強(qiáng)度等于25國(guó)際燭光。1標(biāo)準(zhǔn)燭光 = 10.76 Lux。

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30、LED光源在植物組織培養(yǎng)中的選擇

光是植物生長(zhǎng)中最重要的環(huán)境因子之一，并不是所有的光都有助于植物的光合作用。LED 光源460nm左右的藍(lán)光和660nm左右的紅光是植物最需要的光波，對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育起著關(guān)鍵性的作用。

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如何提高組培苗的移栽成活率

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試管苗本身的質(zhì)量是決定移栽成活率的關(guān)鍵因素，因此培育壯苗是提高移栽成活率的主要措施。具體是在生根培養(yǎng)之前轉(zhuǎn)入不含激素的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根，或在生根培養(yǎng)基中加入一些植物生長(zhǎng)延緩劑（如多效唑、B9等）來(lái)達(dá)到壯苗和生根的目的。

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煉苗是組培過(guò)程中重要的一個(gè)環(huán)節(jié)，也是一個(gè)較為復(fù)雜的技術(shù)體系。提高煉苗成活率是決定組培成敗和降低組培成本的關(guān)鍵。試管苗一般在高濕（100%）、弱光（3000-4000Lux）、恒溫（25℃）下培養(yǎng)，生長(zhǎng)的植株有以下幾個(gè)特點(diǎn)：

葉片無(wú)保護(hù)組織（角質(zhì)層、蠟質(zhì)、表皮毛等），細(xì)胞間隙大，氣孔開(kāi)張大，因此水分散失較快，易于萎蔫。無(wú)根毛或極少，并且有些從愈傷組織上發(fā)育的根與芽的疏導(dǎo)組織不相同，因此吸水能力較弱。

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煉苗移栽時(shí)，環(huán)境有了極大的改變：濕度降低、光照增強(qiáng)、溫度升高、溫差變大。具有以上特點(diǎn)的組培苗，在此環(huán)境下，葉片失水較嚴(yán)重，根系吸水能力不足，吸水量小于蒸騰水量，從而造成植物萎蔫，煉苗失敗。

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空氣溫度上升比基質(zhì)溫度上升快，而根系的吸水能力在一定范圍內(nèi)與溫度是成正比的。當(dāng)氣溫升高，濕度較低時(shí)，葉片蒸騰急速增加，此時(shí)基質(zhì)溫度上不去，根系吸水能力不夠，造成蒸騰大于吸水的失衡狀，從而萎蔫死亡。

要獲得高的煉苗成活率，一方面需提高出瓶苗的質(zhì)量，提高其抗逆性。生根前的壯苗、理想的生根配方和培養(yǎng)環(huán)境的調(diào)控是關(guān)鍵；另一方面就是針對(duì)組培苗特點(diǎn)創(chuàng)造一個(gè)適宜的煉苗環(huán)境，保證空氣濕度，平衡空氣和基質(zhì)的溫度平衡關(guān)系并加強(qiáng)移栽后的管理：

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光照：隨苗的壯弱、喜光或喜陰而定，剛移栽后要有遮蔭條件，根據(jù)苗的恢復(fù)和成活程度逐步增強(qiáng)光照。

溫度：適宜的溫度依植物種類而定，喜溫植物以25oC左右為宜，喜冷植物以18-20o為宜。溫度過(guò)高，蒸騰作用加強(qiáng)，水分失衡，易造成死苗，而過(guò)低則幼苗生長(zhǎng)遲緩，或不易成活。因此試管苗移栽的溫室最好配備有控溫設(shè)備，以保持試管苗移栽后溫度不要變化太大。

水分：保持水分平衡和控制好濕度是試管苗移栽管理的核心?？諝鉁囟鹊?，則試管苗容易萎焉；同時(shí)基質(zhì)水分又不宜太多，基質(zhì)水分過(guò)多，則透氣不良，影響生根，容易導(dǎo)致?tīng)€苗致死.因此，需要在保證空氣濕度足夠大的同時(shí)，盡量確保移栽基質(zhì)良好的透氣狀況?？刹捎梦娂夹g(shù)控制空氣濕度或采用塑料小拱棚的辦法來(lái)提高空氣濕度，使試管苗葉面的蒸騰減少，使小苗始終保持挺拔的姿態(tài)，從而提高成活率。

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