人工計數(shù)的注意事項你Get到了嗎?
牛頓光學(xué)
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? ? ? ?細胞計數(shù)是許多細胞實驗中的一個重要步驟,用來確定樣品中的細胞數(shù)量和存活率。通常情況下,計數(shù)的目的是為了知道如何稀釋未知細胞濃度的樣品,來進行下一步實驗。實驗室中最常用的細胞計數(shù)工具是血球計數(shù)板。那么我們在使用血球計數(shù)板對細胞進行計數(shù)時應(yīng)該注意哪些情況呢?
一、鏡檢
? ? ? ?在準(zhǔn)備對細胞樣品計數(shù)時,首先要確保樣品表面必須是干凈的。任何污染都會導(dǎo)致計數(shù)結(jié)果的不準(zhǔn)確,所以在計數(shù)前,我們應(yīng)當(dāng)先用75%乙醇對血球計數(shù)板與玻璃蓋玻片進行清洗,再用無塵布擦干表面。將清洗完的血球計數(shù)板放在顯微鏡下進行鏡檢,若還是發(fā)現(xiàn)有雜質(zhì)則需要重新進行清洗,直至在顯微鏡下觀察到計數(shù)板上無雜質(zhì)即可。


二、加樣
? ? ? ?在加樣前應(yīng)當(dāng)對樣品中的細胞立即進行混勻處理,是確保被分析樣品具有代表性的重要步驟。一般是輕輕搖晃細胞樣品;然后再配合移液槍吹打細胞樣品。這樣會使細胞分散的更加均勻,減少細胞聚團現(xiàn)象。


三、入鏡計數(shù)
? ? ? ?當(dāng)鏡檢和打散細胞的準(zhǔn)備工作完成后,就可以使用移液槍輕輕將細胞樣品打入血球計數(shù)板中。隨后再將細胞計數(shù)板放在顯微鏡的載物臺中,用顯微鏡觀察細胞。


四、計數(shù)方法
? ? ? ?在顯微鏡下觀察細胞,如果每個大方格內(nèi)少于5個細胞的話,就需將樣品重新離心,用更小的體積重懸細胞;若細胞有相互重疊或因密度太大難以區(qū)分時,則需要再次稀釋樣品到更大的體積。一般為每個大方格存在20-50個細胞即可。為了較快而準(zhǔn)確的計數(shù),計數(shù)時一般選擇“S”型計數(shù)路徑和“記上不記下,記左不記右”的原則進行計數(shù)

五、器材維護
? ? ? ?每次使用完細胞計數(shù)板后都應(yīng)該再次使用酒精進行清洗,用無塵布擦干后存放起來即可,顯微鏡也需要用防塵罩蓋住,以免灰塵落進鏡筒內(nèi)。
? ? ? ?使用傳統(tǒng)人工計數(shù)的方法來對細胞進行計數(shù)是一個費時費力的工作,而且通常數(shù)據(jù)也會因為一些操作的失誤引起較大的誤差,而一臺優(yōu)秀的細胞計數(shù)儀可以完全避免人工失誤造成的誤差,大大提高數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。還可以節(jié)省實驗人員大部分的時間。
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