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一文看懂單克隆抗體常見制備技術(shù)的優(yōu)缺點

2023-06-25 10:45 作者:AtaGenix-普健生物  | 我要投稿

劃重點:

?雜交瘤技術(shù)是獲得單克隆抗體最常用的技術(shù)。

?雜交瘤技術(shù)變體包括B細胞和立體特異性靶向協(xié)議。

?噬菌體展示技術(shù)和單B細胞技術(shù)是雜交瘤技術(shù)的替代方案。

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單克隆抗體(mab)是一種通用的高度特異性結(jié)合蛋白,長期以來被認為是對抗疾病的“魔彈”,也是診斷和研究等其他生物學用途的重要工具。這些應(yīng)用只有在允許分離單個抗體的方法出現(xiàn)后才有可能。雜交瘤技術(shù)是這方面的先驅(qū)。事實上,這項技術(shù)徹底改變了治療和研究領(lǐng)域,1984年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎進一步認可了這一點。那么雜交瘤技術(shù)隨著時間的推移發(fā)展,與其他方法相比,雜交瘤技術(shù)又有哪些優(yōu)勢和局限性呢?

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雜交瘤技術(shù)由Georges K?hler和Cesar Milstein于1975年基于用所需抗原免疫動物,然后將特異性B淋巴細胞與“不朽”骨髓瘤細胞融合,然后被克隆以獲得穩(wěn)定的單克隆細胞系,在選擇感興趣的抗體分泌克隆后,將細胞轉(zhuǎn)移到大規(guī)模培養(yǎng)裝置中,以產(chǎn)生所需數(shù)量的抗體。

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自引入雜交瘤技術(shù)以來,單克隆抗體對醫(yī)學產(chǎn)生了深遠的影響,提供了幾乎更多的診斷和研究試劑來源。鑒于單克隆抗體的通用性和實用性,雜交瘤技術(shù)帶來了許多發(fā)現(xiàn),允許產(chǎn)生針對抗原的抗體,甚至針對同一抗原的不同抗體。但雜交瘤技術(shù)也有其局限性,因此,科學家們在雜交瘤技術(shù)的基礎(chǔ)上,還發(fā)現(xiàn)了噬菌體展示技術(shù)和單B細胞技術(shù)。

雜交瘤技術(shù)

優(yōu)點:

保留了可變區(qū)和恒定區(qū)基因組合的原生配對。

抗體嵌合和人源化方法以及轉(zhuǎn)基因動物可用于獲得用于人類治療的單克隆抗體。

抗體在體內(nèi)親和成熟。

缺點:

需要已知和可用的抗原靶點。

細胞融合和雜交瘤分離效率低。

細胞系的產(chǎn)生和特異性雜交瘤的選擇需要相對較長的時間。

雜交瘤細胞系可能在遺傳上不穩(wěn)定。

細胞培養(yǎng)物污染的持續(xù)風險。

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噬菌體展示技術(shù)

優(yōu)點:

不需要動物宿主。

大量克隆的篩選增加了產(chǎn)生良好單克隆抗體的機會。

分離抗毒性和非免疫原性抗原的單克隆抗體的潛力。

重新設(shè)計天然cdr以產(chǎn)生特異性和親和力更高的單克隆抗體的可能性。

龐大的展示文庫數(shù)據(jù)來源。

缺點:

噬菌體文庫的多樣性取決于細菌轉(zhuǎn)化效率。

抗體格式僅限于scFv和Fab。

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建立噬菌體展示文庫成本高昂。

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單個B細胞技術(shù)

優(yōu)點:

與雜交瘤技術(shù)相比,獲得特異性單克隆抗體的效率更高。

從接種疫苗或自然免疫的人類受試者中分離單克隆抗體的可能性。

原生單克隆抗體的分離,并保留天然同源VH和VL配對。

不需要B細胞培養(yǎng)過程。

具有分離抗體外難以模擬的構(gòu)象決定簇的功能性單克隆抗體的潛力。

可以區(qū)分處于不同發(fā)育和分化階段的B細胞。

在實驗研究中,B細胞可以從多個樣本中分離出來,而不需要對動物實施安樂死。

抗體在體內(nèi)經(jīng)歷親和成熟。

缺點:

單細胞分選設(shè)備價格昂貴。

RT-PCR程序可能具有挑戰(zhàn)性。

針對B細胞標記物的抗體并非適用于所有物種。


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