單細(xì)胞解離的實(shí)質(zhì)

通過破壞掉細(xì)胞間隙中維系細(xì)胞關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)，使細(xì)胞分離開來。在動(dòng)物細(xì)胞解離單細(xì)胞中通常采用膠原蛋白酶和胰蛋白酶來處理組織，從而分離成單個(gè)細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液。

動(dòng)物細(xì)胞的基本特性

1. 相較于植物細(xì)胞，動(dòng)物細(xì)胞沒有細(xì)胞壁較為脆弱；2. 動(dòng)物細(xì)胞的體積稍小于植物細(xì)胞的體積；3. 動(dòng)物細(xì)胞的直徑一般在10μm-30μm；4. 大部分動(dòng)物細(xì)胞在肌體內(nèi)相互粘連以集群形式存在。

單細(xì)胞解離步驟

1. 查詢文獻(xiàn)資料查找此次實(shí)驗(yàn)對(duì)應(yīng)樣本處理方案；2. 接收樣本，確定樣本寄存狀態(tài)；3. 組織解離器械的準(zhǔn)備；4. 清洗組織多余血塊；5. 根據(jù)樣本對(duì)應(yīng)的消化方案進(jìn)行消化，加入對(duì)應(yīng)的酶及培養(yǎng)基溶液；6. 每隔一段時(shí)間觀察對(duì)應(yīng)細(xì)胞數(shù)量，細(xì)胞數(shù)量較多時(shí)終止；7. 離心收集細(xì)胞；8. 去死，去碎片，裂紅等處理（根據(jù)細(xì)胞數(shù)量及細(xì)胞狀態(tài)確定是否要進(jìn)行相應(yīng)操作）；9. 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。

單細(xì)胞懸液制備步驟

1.組織保存

新鮮樣品需儲(chǔ)存于組織保護(hù)液中，并在48小時(shí)內(nèi)解離。2.組織剪切和清洗

需將樣本表面的血污清洗干凈；組織盡量剪碎，使之充分與酶液進(jìn)行消化。

3.組織解離

加入對(duì)應(yīng)的酶之后放入37℃水浴鍋中進(jìn)行酶解；若樣本比較難消化，可提高消化時(shí)間或酶液濃度。（不同物種、不同組織類型需要的酶種類、濃度、消化時(shí)間各不相同，需對(duì)特定組織個(gè)性化定制解離方案）4.計(jì)數(shù)AOPI染色后Ccountstar計(jì)數(shù)儀進(jìn)行計(jì)數(shù)及統(tǒng)計(jì)。

解離小問題應(yīng)對(duì)策略

1.現(xiàn)象：剪碎的組織在消化過程中出現(xiàn)溶液膠狀，組織塊分布在整個(gè)體系中，無法沉于底部；

建議：可以加入適量的膠原酶II消化0.5-1小時(shí)。

2.現(xiàn)象：鏡檢下的細(xì)胞仍存在細(xì)胞間交聯(lián)的情況；

建議：可加入適量的DNA酶（可將包裹細(xì)胞的基因組進(jìn)行酶解切斷，可改善部分細(xì)胞交聯(lián)現(xiàn)象）。

3.現(xiàn)象：待解離組織塊小；

建議：可采取1.5ml離心管進(jìn)行消化（使酶充分接觸組織、減少試劑用量）。

胡潤(rùn) | 文案

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