熒光素二乙酸酯 (FDA) 是一種細(xì)胞滲透性酯酶底物，可作為活性探針，測量激活其熒光所需的酶活性和細(xì)胞膜完整性，這是其熒光產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)保留所必需的。 在被細(xì)胞內(nèi)酯酶水解后，這種 AM 酯會產(chǎn)生熒光素。

圖1.FDA 可透過細(xì)胞膜并在活細(xì)胞內(nèi)積聚為熒光素

?由于熒光素的親水性不如 BCECF 或鈣黃綠素，因此熒光素從細(xì)胞中的滲漏率相當(dāng)高。 FDA 也用于流式細(xì)胞術(shù)。 熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長分別為 488 nm 和 530 nm。

圖2. FDA染色的?HeLa細(xì)胞

使用案例

圖3.植物細(xì)胞的 FDA 和 PI 染色。 a 顯示植物細(xì)胞的熒光素二乙酸酯 (FDA) 和碘化丙啶 (PI) 染色的圖表。 上圖：非熒光 FDA 分子通過完整的質(zhì)膜并被細(xì)胞內(nèi)酯酶水解產(chǎn)生熒光素。 不可透過膜的熒光素在細(xì)胞質(zhì)中積累并呈現(xiàn)綠色熒光。 底部：在質(zhì)膜破裂的非活性細(xì)胞中，PI 進入細(xì)胞并嵌入 DNA，在細(xì)胞核中形成亮紅色熒光復(fù)合物。 PI 還會對活細(xì)胞和死細(xì)胞的細(xì)胞壁進行染色。 b 用 FDA（綠色）和 PI（紅色）染色的水稻鞘表皮細(xì)胞（頂部）和緊靠其下方的葉肉細(xì)胞（底部）的單平面共聚焦圖像。 比例尺= 20 μm。 c FDA 染色的水稻鞘表皮細(xì)胞的時程平均像素強度。 藍(lán)線是細(xì)胞質(zhì)熒光定義區(qū)域的強度測量值的平均值±SD（每個時間點 n = 6）。 熒光素強度平均在染色后 15 分鐘達到峰值，然后穩(wěn)步下降。