細胞學堂 |如何培養(yǎng)人正常支氣管上皮細胞BEAS-2B
Beas-2B細胞從一位非癌個體的正常人支氣管上皮病理切片分離， 經(jīng)過腺病毒12-SV40雜交病毒感染并篩選克隆建成永生化細胞系 。BEAS-2B細胞保留了對血清反應進行鱗狀分化的能力，并用于篩選誘導或影響分化及致癌的化學或生物制劑。PS：細胞角蛋白及SV40抗原染色陽性。
本文為大家介紹BEAS-2B的培養(yǎng)條件及注意事項：
一、培養(yǎng)條件
【生長特性】?貼壁
【形態(tài)特征】?上皮細胞樣
【培養(yǎng)條件】?BEGM培養(yǎng)基????
【傳代比例】1:4傳代（培養(yǎng)面積比）,推薦初始密度為1500-3000細胞/CM2，在細胞完全匯合前傳代，防止細胞鱗狀分化。傳代時應嚴格控制密度，最少不能低于60%，最高不超過80%。
【傳代方式】胰酶（0.25%Typsin+0.53 MM EDTA+0.5%POLYVINYLPYRROLIDONE (PVP)）消化2分鐘
【換液頻率】2~3天換液1次
【凍存液配方】89%BEGM?+10%DMSO+1% PVP
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二、注意事項
使用無血清培養(yǎng)基BEGM培養(yǎng)，效期2個月。
消化條件：無鈣、鎂離子的PBS清洗細胞后，加1mL胰酶，胰酶潤洗細胞表面3-4次后，吸走胰酶，放入37℃培養(yǎng)箱消化2分鐘左右。（具體消化時間請在拿到細胞前2次傳代時，及時觀察，以實際情況為主。）
?終止消化時，用1mL胰蛋白酶抑制劑（2.5mg/mL）終止，離心去上清，然后用3mL PBS再次清洗細胞，離心收集后，用新的培養(yǎng)基重懸后鋪板。（消化過程中，不要拍瓶身，振蕩可促使細胞聚團。）
注意：80%左右匯合度時傳代，完全匯合會使細胞末端分化。
剛復蘇要使用提前用包被液包被過的培養(yǎng)器皿（包被液配方：0.01mg/mL黏連蛋白、0.03mg/mL Ⅰ型膠原和0.01mg/mL BSA），以增加細胞貼附。培養(yǎng)器皿提前使用包被液處理，包被時間至少4小時，建議過夜。
包被液使用方法：加2-3mL到T25培養(yǎng)瓶（3-4mL到10cm培養(yǎng)皿），放無菌環(huán)境中，擰上蓋子，自然風干。
復蘇后的傳代培養(yǎng)過程中可不做包被處理，細胞可正常貼壁。
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三、血清對細胞的影響
用不含血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)時，BEAS-2B細胞具有典型的呼吸上皮細胞多邊形態(tài)；用含血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)時，密度低時細胞形態(tài)會呈長梭型，但密度高一些以后形態(tài)會變短。
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★?通過比較有/無FBS培養(yǎng)的BEAS-2B的全基因組基因表達情況，發(fā)現(xiàn)部分生物途徑發(fā)生了基因表達變化，主要包括致癌和能量代謝有關(guān)的途徑。
★?實驗實時測量BEAS-2B的氧消耗和糖酵解，發(fā)現(xiàn)FBS培養(yǎng)的細胞總糖酵解能力增加了1.4倍，基礎(chǔ)呼吸增加了1.9倍，產(chǎn)生ATP所消耗的氧氣增加了2.0倍；與不使用FBS培養(yǎng)的BEAS-2B相比，最大呼吸量增加了2.8倍。
★?43%的亞砷酸鹽調(diào)節(jié)基因在mRNA水平上受到胎牛血清的調(diào)節(jié)。
★?細胞毒性研究顯示，暴露在5%的FBS中8周的BEAS-2B細胞對亞砷酸鹽的細胞毒性的敏感性幾乎是不接觸FBS的BEAS-2B細胞的5倍。
★?胎牛血清誘導的BEAS-2B的表型變化表明，在使用BEAS-2B作為砷毒性的實驗模型時 ，應仔細考慮培養(yǎng)條件。
【參考文獻】
[1]?Zhao F , ?Klimecki W T . Culture conditions profoundly impact phenotype in BEAS‐2B, a human pulmonary epithelial model[J]. Journal of Applied Toxicology Jat, 2015, 35(8):945-951.??
DOI:10.1002/jat.3094
[2]?Li T, Liu Y, Xu W, et al. Polydatin mediates Parkin-dependent mitophagy and protects against mitochondria-dependent apoptosis in acute respiratory distress syndrome[J]. Laboratory Investigation, 2019, 99(6): 819-829.?
?DOI:10.1038/s41374-019-0191-3?(此文獻Beas-2B細胞購自賽庫生物）
[3]?Tan H W, Liang Z, Yao Y, et al. Lasting DNA Damage and Aberrant DNA Repair Gene Expression Profile Are Associated with Post-Chronic Cadmium Exposure in Human Bronchial Epithelial Cells[J]. Cells, 2019, 8(8).??
DOI:10.3390/cells8080842 (此文獻Beas-2B細胞購自賽庫生物）
[4]?Li X, Jia Y, Nan A, et al. CircRNA104250 and lncRNAuc001.dgp.1 promote the PM2.5-induced inflammatory response by co-targeting miR-3607-5p in BEAS-2B cells[J]. Environmental Pollution, 2020.??
DOI:10.1016/j.envpol.2019.113749 (此文獻Beas-2B細胞購自賽庫生物）
[5]??Jia Y , ?Li X , ?Nan A , et al. Circular RNA 406961 interacts with ILF2 to regulate PM2.5-induced inflammatory responses in human bronchial epithelial cells via activation of STAT3/JNK pathways[J]. Environment International, 2020, 141:105755.???
DOI:10.1016/j.envint.2020.105755 ?(此文獻Beas-2B細胞購自賽庫生物）
