熒光染料是指吸收某一波長的光波后能發(fā)射出另一波長大于吸收光的光波的物質(zhì)。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨使用，也可以組合成復合熒光染料使用。

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熒光染料由于靈敏度高，操作方便，逐漸取代了放射性同位素作為檢測標記，其廣泛應用于熒光免疫，熒光探針，細胞染色等。包括特異性的DNA染色，用于染色體分析、細胞周期、細胞凋亡等相關研究。另有很多核酸染料在多色染色系統(tǒng)中是非常有用的復染劑，可作為背景對照，標記細胞核使細胞內(nèi)結構的空間關系一目了然。

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免疫分析

熒光標記的單克隆抗體技術為流式細胞儀在研究細胞膜和細胞內(nèi)各種功能性抗原、腫瘤基因蛋白等領域擴展了無限的應用空間。熒光探針可以通過蛋白質(zhì)交聯(lián)劑共價結合在單克隆抗體上。免疫熒光標記zui常用的染料有異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)、藻紅蛋白（PE）以及AlexaFluor系列染料等。

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核酸檢測

核酸熒光染料對細胞核染色后定量測量細胞所發(fā)出的熒光強度，就可以確定細胞核中DNA、RNA的含量，并可以對細胞周期和細胞的增殖狀況進行分析。有多種熒光染料可以對細胞中的DNA或RNA染色，常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst 33342等，RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。

活性熒光染料及其衍生物廣泛用于共價標記生物分子，例如抗體，碳水化合物，核酸，蛋白質(zhì)，肽和寡核苷酸。各活化官能團對應的反應基團如下：

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琥珀酰亞胺酯（Succinimidyl esters）/ NHS酯-用于標記抗體，蛋白質(zhì)，肽，胺修飾的寡核苷酸和其他生物分子上的游離氨基（-NH 2）

馬來酰亞胺（Maleimides）-用于標記抗體，蛋白質(zhì)和肽上的巰基

疊氮化物(Azides)-通過點擊化學法（Click）標記乙烯基

炔烴(Alkynes)-通過點擊化學方法標記疊氮化物

酰肼(Hydrazides)-用于標記醛基和酮基

羧酸(Carboxylic acids)-經(jīng)碳二亞胺預活化后用于標記胺或用于醇的Steglich酯化

氨基(Amines)-具有游離氨基的熒光染料，用于與各種親電子化合物（如活化的酯和環(huán)氧化物）偶聯(lián)。

四嗪（Tetrazines）-通過反電子需求Diels-Alder反應標記反式環(huán)辛烯(TCO)，環(huán)丙烯和其他活化的烯烴。

亞磷酰胺(Phosphoramidite)-亞磷酰胺標記的染料可用于標記寡核苷酸

環(huán)炔(Cycloalkyne)-具有環(huán)炔基部分的染料可用于無銅點擊化學反應。

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文章來源：https://www.amyjet.com/featured/nhs-esters.shtml