IIS型限制內(nèi)切酶，Golden Gate克隆的好幫手！
1970年，Ⅱ型限制性核酸內(nèi)切酶Hind II由Smith等首先在流感嗜血桿菌的Rd型菌株中發(fā)現(xiàn)。Smith也憑借在限制酶領(lǐng)域開創(chuàng)性的研究，與Daniel Nathans、Werner Arber一起獲得1978諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。
II型限制性核酸內(nèi)切酶
Ⅱ型限制性核酸內(nèi)切酶是一類分子質(zhì)量較小的單體蛋白，識(shí)別和切割雙鏈DNA分子時(shí)僅需要Mg2+存在即可，不需要ATP。其切割序列常常是4-6 bp回文結(jié)構(gòu)，有兩種切割方式，一種是交錯(cuò)切割，形成粘性末端，另一種是在同一位置上切割雙鏈，產(chǎn)生平末端。
Ⅱ型限制性內(nèi)切酶也可以分成很多小類別，識(shí)別的序列也各有特點(diǎn)；
doi.org/10.1093/nar/29.18.3705
其中IIS型限制性內(nèi)切酶的序列識(shí)別區(qū)域和催化區(qū)域被一個(gè)多肽連接子分開，一般以單體形式結(jié)合，但會(huì)以瞬時(shí)同源二聚體形式發(fā)揮切割作用。
doi.org/10.1093/nar/gku447
IIS型限制性內(nèi)切酶
IIS型限制性內(nèi)切酶切割DNA產(chǎn)生的粘性末端通常為2個(gè)堿基或4個(gè)堿基。在連接反應(yīng)中，粘性末端的堿基數(shù)越多，連接產(chǎn)物的保真度越高，因此Golden Gate Assembly通常采用能夠產(chǎn)生4堿基粘性末端的IIS限制酶，常用的有BsaI、BsmBI和BbsI 。
三種IIS型限制性內(nèi)切酶的特異性可分別記為：BsaI (GGTCTC 1/5),BsmBI (CGTCTC 1/5),BbsI (GAAGAC 2/6)。除此之外，能夠產(chǎn)生3堿基粘性末端的IIS型限制酶SapI (GCTCTTC 1/4) 也常被使用。
ABclonal可以提供RK21129|Eco31I (BsaI)，規(guī)格1000U ，Eco31I，是BsaI的同裂酶，與BsaI的功能相同?？梢蕴禺愋宰R(shí)別雙鏈DNA位點(diǎn)(圖1）并進(jìn)行酶切，適用于質(zhì)粒DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的限制性酶切。結(jié)合連接試劑在配套的Buffer中具有100%活性，支持一管化反應(yīng)，提升“酶切-修飾-連接”的體驗(yàn)。其識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如下圖：
應(yīng)用場(chǎng)景
1.分子克隆（Golden gate cloning）；
2.基因編輯;
3.合成生物學(xué);
產(chǎn)品特點(diǎn)
01酶切效果
媲美進(jìn)口品牌N*
02高性能搭配高濃度T4 連接酶，適用于SgDNA，單片段及多片段連接，且連接效率與競(jìng)品相當(dāng)
支持高濃度和低濃度及定制濃度，滿足客戶多種需求
產(chǎn)品數(shù)據(jù)展示
1、酶活鑒定
以1μg質(zhì)粒為模板，20ul反應(yīng)體系，投入10U Eco31I，37℃ 反應(yīng)1h，80℃ 失活20min；活力與競(jìng)品的活力相當(dāng)。
2、Sg DNA連接效率鑒定
ABclonal Eco31I(BsaI）在Sg1和Sg2的連接效率均為90%-100%，與競(jìng)品N，競(jìng)品T競(jìng)品相當(dāng)，高于競(jìng)品M活性。
3、單片段連接效率(250bp,1kb）
ABclonal Eco31I(BsaI）在250bp連接效率為100% ，與競(jìng)品N相當(dāng)；1kb連接效率為40%，高于競(jìng)品N（ 20%）。
