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基因工程—表達(dá)載體構(gòu)建【選必三】|0基礎(chǔ)救星!

2023-04-29 23:01 作者:此云無幻亦有幻  | 我要投稿

3.2.3 表達(dá)載體構(gòu)建

一、表達(dá)載體構(gòu)建

1.基因工程的基本操作程序

①目的基因的篩選與獲取

基因表達(dá)載體的構(gòu)建

③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

④目的基因的檢測(cè)與鑒定

2.基因表達(dá)載體構(gòu)建

(1)目的

構(gòu)建基因表達(dá)載體是為了使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,復(fù)制,表達(dá)。

(2)過程

(3)基因表達(dá)載體的組成

基因表達(dá)載體包含目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因,(復(fù)制原點(diǎn))

啟動(dòng)子:RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄

終止子:RNA聚合酶脫離部位,終止轉(zhuǎn)錄

標(biāo)記基因:用于鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因,例如抗生素抗性基因,熒光蛋白合成基因等

1)單酶切和雙酶切

①單酶切的弊端

單酶切的結(jié)果:①目的基因和質(zhì)粒的正向連接②目的基因和質(zhì)粒的反向連接③目的基因或質(zhì)粒自連。

只有目的基因和質(zhì)粒的正向連接是基因工程中所需要的重組DNA。

②雙酶切的優(yōu)勢(shì)

雙酶切能保證自的基因與運(yùn)載體定向連接,防止目的基因與運(yùn)載體發(fā)生任意連接或自連。

二、導(dǎo)入受體細(xì)胞

1.目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

三、目的基因檢測(cè)與鑒定

探針:在含目的基因的DNA片段上用放射性同位素(或熒光分子)標(biāo)記

【DNA分子雜交技術(shù)】轉(zhuǎn)基因生物的基因組提取出來,在含目的基因的DNA片段上用放射性同位素(或熒光分子)標(biāo)記,以此作為探針,使探針與基因組DNA雜交,若顯示出雜交帶,就表明目的基因已導(dǎo)入受體細(xì)胞。

【核酸分子雜交技術(shù)】從轉(zhuǎn)基因生物中提取出mRNA,同樣用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交,若顯示出雜交帶,則表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mRNA。

【抗原-抗體雜交技術(shù)】從轉(zhuǎn)基因生物中提取出蛋白質(zhì),用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原-抗體雜交。若有雜交帶出現(xiàn),表明目的基因已表達(dá)合成出蛋白質(zhì)。



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