回收率高,操作簡單,GeneCopoeia慢病毒濃縮試劑盒針不戳
GeneCopoeia慢病毒濃縮試劑盒對所有類型的慢病毒顆粒進行簡單快速的濃縮。該試劑盒操作簡單,僅需將5×濃縮液與慢病毒上清按比例混合并孵育一段時間,正常轉速離心,即可得到濃縮的慢病毒顆粒,回收率高達90%以上,可提高100倍病毒滴度。
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應用:
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用于人Bmi-1基因shRNA慢病毒表達載體的構建、病毒的濃縮及其病毒滴度的測定研究:
構建人Bmi-1基因的慢病毒載體,通過轉染293T細胞收集病毒液,濃縮病毒液并對該病毒液進行滴度的測定。
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設計以Bmi-1基因為靶點的短發(fā)夾狀RNA(sh RNA),將3條Bmi-1基因的sh RNA片段插入至慢病毒載體,對其進行篩選及鑒定。轉染具有高轉移性的293T細胞,收集病毒液并對病毒液進行濃縮,利用熒光滴度法檢測病毒的滴度。
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構建含有Bmi-1-sh RNA的重組慢病毒載體,經(jīng)轉化大腸桿菌DH5α后提取質粒,與空載體均經(jīng)Eco RI和Bam HI雙酶切后,瓊脂糖凝膠電泳鑒定。測序結果證實重組的RNA干擾慢病毒載體均有一段與實驗設計合成的靶向鏈相符。測序結果顯示重組構建成功。
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將篩選出的重組慢病毒載體PLVX-sh RNA2-Bmi-1與包裝質粒PLP1、PLP2和PLP/VSVG共轉染293T細胞,同時設立空載體為對照組。收集的病毒濃縮液經(jīng)稀釋后感染293T細胞,利用熒光滴度法成功檢測出病毒滴度。
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結論:成功構建了Bmi-1基因的sh RNA慢病毒表達載體,通過轉染293T細胞后獲得了該基因的病毒液并對病毒液進行濃縮,包裝成慢病毒顆粒,通過感染目的細胞后用熒光法成功測定出該病毒液的滴度,為探討下一步Bmi-1基因對鼻咽癌細胞的功能影響奠定了基礎。艾美捷科技是GeneCopoeia的中國代理商,為您提供優(yōu)質的慢病毒濃縮試劑盒。?