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艾美捷T7 RNA聚合酶:高度啟動(dòng)子專一性

2022-11-10 15:49 作者:艾美捷  | 我要投稿

T7 RNA聚合酶(T7 RNA Polymerase)是一種RNA聚合酶,分子量約99kDa。專門催化5'→3'方向的RNA形成過程。

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T7RNA聚合酶具有高度啟動(dòng)子專一性,且只會(huì)轉(zhuǎn)錄T7噬菌體中位于T7啟動(dòng)子下游的的DNA或DNA復(fù)制品。

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此酶在合成RNA的過程中,需要DNA模板與鎂離子(Mg2+)作為輔因子。牛血清蛋白(bovine serum albumin,BSA)及精胺(spermidine)對(duì)此酶具促進(jìn)效果。與細(xì)菌的RNA聚合酶的差異之一,在于T7RNA聚合酶不受抗生素立泛霉素(rifampicin)抑制。

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艾美捷T7 RNA聚合酶是一種DNA依賴性RNA多聚酶(99kDa),對(duì)含有T7噬菌體啟動(dòng)子的DNA序列的體外RNA合成進(jìn)行催化。高濃縮版T7 RNA聚合酶HC非常適合建立和優(yōu)化高產(chǎn)量的體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。所提供的T7 IVT設(shè)置緩沖液、MgCl2和DTT溶液能夠測(cè)試不同的反應(yīng)條件,例如核苷酸/MgCl2濃度。

艾美捷T7 RNA聚合酶化學(xué)性質(zhì):

僅供體外使用!

運(yùn)輸:凝膠包裝運(yùn)輸

儲(chǔ)存條件:-20°C儲(chǔ)存

避免凍融循環(huán)

保質(zhì)期:12個(gè)月

純度:≥?95%(SDS-PAGE)

形式:液體

濃度:2.0–2.2μg/μl(T7 RNA聚合酶HC儲(chǔ)存緩沖液中的A280,?=140 l mmol-1 cm-1[1])

J小優(yōu)化的分析設(shè)置建議:HighYield T7 RNA合成試劑盒(#RNT-101)。

活性:1μl T7 RNA聚合酶HC在37°下10分鐘內(nèi)產(chǎn)生>/=30μg RNA。這相當(dāng)于1000 U NEB的T7 RNA聚合酶(高濃度),#M0460T(活性測(cè)定條件:1x T7 IVT建立緩沖液,補(bǔ)充10 mM DTT、12 mM MgCl2、3 mM NTPs、1μl T7 RNA聚合酶HC和1μg DNA模板(1.4 kpb RNA轉(zhuǎn)錄物),20μl。用熒光微板測(cè)定法測(cè)定RNA產(chǎn)量。)

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艾美捷T7 RNA聚合酶組分

T7 RNA Polymerase HC

1x 50?μl (2?μg/μl)

50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 0.1 % Triton-X-100, 50 % Glycerol (v/v), pH 8.0

T7 IVT Set-up Buffer

1x 200?μl (10x)

400 mM Tris-HCl (pH 8.0), 20 mM Spermidin

DTT

1x 100?μl (100 mM)

MgCl2

1x 200?μl (200 mM)

其它研究:

RNT-101,高產(chǎn)T7 RNA合成試劑盒


艾美捷T7 RNA聚合酶:高度啟動(dòng)子專一性的評(píng)論 (共 條)

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