泌尿系統(tǒng)結(jié)石動(dòng)物模型【北京動(dòng)物實(shí)驗(yàn)外包】

【造模機(jī)制】泌尿系統(tǒng)結(jié)石由尿內(nèi)多種晶體物質(zhì)和非晶體物質(zhì)凝聚而成,結(jié)石的病因與尿內(nèi)晶體濃度增高及尿液理化因素的改變有關(guān),可發(fā)生于腎盂、輸尿管、膀胱、尿道等處。常用藥物誘發(fā)泌尿結(jié)石模型,可用誘石劑乙二醇、乙二酰胺、對苯二甲酸等通過增加尿液中草酸濃度而誘發(fā)動(dòng)物體內(nèi)形成草酸鈣結(jié)石。

【造模方法】

1.乙二醇和氯化銨法選用 Wistar 雄性健康大鼠,體重 180～220g,隨機(jī)分組,1%乙二醇飲水+2%氯化銨,每天灌胃 1ml/只,連續(xù) 28 天,實(shí)驗(yàn)結(jié)束前用代謝籠收集并測24 小時(shí)尿量和 24 小時(shí)尿液中草酸排出量。斷頸處死大鼠,下腔靜脈穿刺取血,3500r/min 離心 10 分鐘后,取上層血清檢測?BUN.Cr.P.Ca*+含量(Olympus Au1000 自動(dòng)分析儀)。切取雙腎,縱向剖開,取左側(cè)腎臟用 10%中性甲醛固定,作常規(guī) HE 石蠟切片和 Von-Kossa's 染色,偏光顯微鏡觀察腎組織草酸鈣結(jié)晶形態(tài)分布及腎組織的病理改變,日立 180-80 型原子吸收光譜儀進(jìn)行腎組織 Ca*t、Mg**含量,尿液中總 Ca+含量,總 Met含量測定。

2.乙二酰胺飼喂法選用 SD 大鼠,體重 220~240g;新西蘭家兔,4 個(gè)月齡,體置2.0~2.3kg。大鼠飼喂 1.2％乙二酰胺~鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料 3 天以上,100%的大鼠造成泌尿系結(jié)石；新西蘭家兔飼喂 1%乙二酰胺-兔標(biāo)準(zhǔn)飼料 20 天,100％復(fù)制成腎結(jié)石。1.2%乙二酰胺-鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料配法:取鼠飼料(30%豆粉,30%面粉,20%玉米粉,6%組粉,青油,0.5%維生素,1%酵母粉,9%麩皮,1.5％骨粉,1%食鹽)998k.加入乙二酰胺12g」充分拌勻,壓成顆粒料,經(jīng) 60～80℃烤干后備用。

3.對苯二甲酸法選用幼年 SD 大鼠,體重 50～60g,雌雄兼用,單籠飼養(yǎng)。飲料中加5%的致石劑苯二甲酸(TPA)(德國 Merck 公司產(chǎn)品),用此飼料飼養(yǎng)動(dòng)物共 14 天,大鼠自由飲水。膀胱結(jié)石檢查方法是在戊***鈉麻醉下取出膀胱,用 10%中性甲醛固定,石蠟包埋,連續(xù)切片,片厚 8μ,每隔 10 片取 1 片作 Vonr-Kossa's 鈣顯示法染色,該法可見鈣鹽影黑色。切片染色后在顯微鏡下觀察、照相。

【模型特點(diǎn)】

1.乙二醇模型乙二醇+氯化銨給藥 28 天可見尿鈣、腎鈣明顯增加,腎組織可見大量草酸鈣結(jié)晶沉積。腎盂內(nèi)有小結(jié)石形成,晶體布滿全腎,E要存在于近曲小管和遠(yuǎn)曲小管，上皮細(xì)胞明顯腫脹、變性、壞死,管腔明顯擴(kuò)張。

2.乙二酰胺模型 68 只大鼠自食乙二酰胺-鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料 3 天.6 天、9 天、13 天均產(chǎn)生肉眼可見的腎輸尿管和膀胱米黃色結(jié)石,其結(jié)石率達(dá) 100％。一般腎和膀胱結(jié)石小如小米，大如綠豆,形似不規(guī)則球狀;輸尿管結(jié)石好發(fā)部位在入膀胱口處,但亦見中部和上部栓塞樣結(jié)石。0.5％乙二酰胺-兔標(biāo)準(zhǔn)飼料喂 30 天,均能造成腎內(nèi)結(jié)石,其中 73％的動(dòng)物為腎沙石,27％為腎結(jié)石；1%乙二酰胺給藥 20 天以上,100％的動(dòng)物產(chǎn)生腎結(jié)石;2％乙二酰胺給藥 15天,93%為腎結(jié)石,7%為沙石。

3.對苯二甲酸(TPA)模型 5％的 TPA 致石劑飼喂大鼠 14 天可成功地建立大鼠實(shí)驗(yàn)性膀胱結(jié)石模型。該模型特點(diǎn)是所有大鼠膀胱均含有鈣結(jié)石小體。

【應(yīng)用范圍】泌尿系統(tǒng)結(jié)石實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型不但可以深入了解泌尿系統(tǒng)結(jié)石的形成過程和機(jī)制,印證或否定某一涉及泌尿系統(tǒng)結(jié)石成因的代謝問題,而且可以篩選抗結(jié)石的中西藥物,確認(rèn)其臨床藥理。因此,設(shè)計(jì)和建立與人類泌尿系統(tǒng)結(jié)石相類似的動(dòng)物模型,對探討泌尿系統(tǒng)結(jié)石的發(fā)病機(jī)制,預(yù)防和延緩結(jié)石形成,尋找防治泌尿系統(tǒng)結(jié)石的藥物等方面均占有重要的位置。

【注意事項(xiàng)】

1.灌胃給藥與自由攝取相比,有用量準(zhǔn)確且恒定的優(yōu)點(diǎn)可避免自由攝取時(shí)不易控制給藥量的不足,應(yīng)用時(shí)應(yīng)予注意。

2.毒性劑氯化銨與 1%乙二醇配用成石效果佳但氯化銨的濃度選擇很重要,0.75％氯化銨+1%乙二醇,需要給藥 8 周,1%和 2%氯化銨分別灌胃 1 周和 3 周均能明顯促進(jìn)1%乙二醇的誘石效果,鑒于氯化銨對消化道有刺激作用,使大鼠厭食、消瘦、委靡,因此 1%氯化銨+1%乙二醇飲用 1 周成為最佳誘石組合。

【模型評估】泌尿系統(tǒng)結(jié)石中草酸鈣結(jié)石占 60％,常以乙二醇等為誘石劑,促使體內(nèi)草酸明顯增加,尿草酸濃度升高,形成泌尿系統(tǒng)結(jié)石,其造模結(jié)果穩(wěn)定,重復(fù)性好,形成的結(jié)石大多分布在腎乳頭、髓質(zhì)及皮質(zhì)等部位,且為慢性成石,適用于防結(jié)石藥物的篩選,療效觀察及成石過程中的病理學(xué)研究。

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