高濃度無(wú)酚紅基質(zhì)膠（體內(nèi)實(shí)驗(yàn)PDX/CDX?異種移植）分別有標(biāo)準(zhǔn)高濃度和低因子高濃度，它們的粘度較高，凝膠時(shí)間較快，更適合于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)（動(dòng)物模型）常被應(yīng)用于PDX/CDX模型建立、體內(nèi)血管生成測(cè)定等。蛋白濃度：16-26 mg/mL。

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基質(zhì)膠是一種源自小鼠肉瘤細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成的水凝膠，包含許多組織基底膜所有已知主要成分，包括層粘連蛋白?(~60%)、膠原蛋白?IV (~30%)、巢蛋白?(~8%)?和硫酸肝素蛋白多糖透明聚糖?(~2–3%)，以及生長(zhǎng)因子等共計(jì)14000種多肽和1851種蛋白。

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基質(zhì)膠可以改善正常和轉(zhuǎn)化的貼壁依賴性上皮細(xì)胞以及其它細(xì)胞類型的附著和分化，因此是使用最為廣泛的細(xì)胞體外3D培養(yǎng)的支架，尤其是類器官培養(yǎng)。

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物理性質(zhì)：

可溶水凝膠，4℃為液態(tài)，37℃為半固體凝膠狀態(tài)。液態(tài)（4℃）與半固體凝膠態(tài)（37℃）可以反復(fù)轉(zhuǎn)換。

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艾美捷Biogradetech高濃度無(wú)酚紅基質(zhì)膠（體內(nèi)實(shí)驗(yàn)PDX/CDX?異種移植）

中文名稱：高濃度，無(wú)酚紅，基質(zhì)膠（體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，PDX/CDX?異種移植）

英文名字：HC Basement Membrane Matrix, Phenol Red-free (For in vivo experiments, PDX and CDX)

Biogradetech貨號(hào)：A-MGL26-5mL

規(guī)格：5mL

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Biogradetech高濃度無(wú)酚紅基質(zhì)膠（體內(nèi)實(shí)驗(yàn)PDX/CDX?異種移植）應(yīng)用：

對(duì)細(xì)胞3D培養(yǎng)具有更好的支撐性，適用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，如體內(nèi)成瘤，血管生成，腫瘤類器官培養(yǎng)，PDX建模等。

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操作方法：

類器官培養(yǎng)、分化

1.?將分裝后的基質(zhì)膠置于碎冰盒中，并將其置于4℃冰箱過(guò)夜融化備用；

2.?實(shí)驗(yàn)開始前，將24孔培養(yǎng)板置于37℃培養(yǎng)箱中預(yù)熱；

3.?將收集到的細(xì)胞懸液與溶解后的基質(zhì)膠以體積比1：2的比例進(jìn)行混合，并放置于冰盒之上；（此操作需在冰盒上進(jìn)行，防止基質(zhì)膠凝固）

4.?取出預(yù)熱的24孔板，并使用預(yù)冷的槍頭吸取50μL混合物，快速滴加在培養(yǎng)孔板中；

5.?將24孔板放置于培養(yǎng)箱中，靜置5min，之后將孔板倒扣，靜置25min；

6.?待基質(zhì)膠凝固后，向24孔板中添加500μL的類器官培養(yǎng)基，并放置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

體外血管生成研究

1.?將96孔板放置于冰盒之上，取70-100μL基質(zhì)膠加入到板孔中，輕輕震蕩使其均勻鋪滿板底；

2.?將孔板置于37℃的細(xì)胞培養(yǎng)箱中使基質(zhì)膠凝固；

3.?取200μL含有1×104個(gè)的HUVEC細(xì)胞添加到凝固的基質(zhì)膠之上；

4.?將處理好的孔板放置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行孵育；

5.?在之后的2-12h內(nèi)不間斷觀察生成的血管樣網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。

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薄膠成膠方法：

1.?凍融后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀；

2.將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上，加入濃度為50?μL/cm2生長(zhǎng)面積的基質(zhì)；

3.?在37℃放置30分鐘，即可使用。

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厚膠成膠方法：

1.?凍融后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀；

2.?將需要使用的培養(yǎng)板置于冰浴，將培養(yǎng)的細(xì)胞與基質(zhì)膠混合，用移液槍頭使其懸浮于基質(zhì)中，加入濃度為150－200?μL/cm2生長(zhǎng)面積的基質(zhì)膠；

3.?在37℃放置30分鐘，可成膠，可以加入細(xì)胞培養(yǎng)的基質(zhì)，也可使細(xì)胞直接生長(zhǎng)在膠表面。

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薄層包被方法：

1.?凍融后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀；

2.?根據(jù)使用需要，采用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋基質(zhì)膠，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要確定最佳包被濃度；

3.?將稀釋的基質(zhì)膠包被于所需的培養(yǎng)器皿中，包被量至少覆蓋整個(gè)器皿的生長(zhǎng)表面。室溫下孵育1小時(shí)；

4.?去除未結(jié)合的基質(zhì)膠，用無(wú)血清培養(yǎng)基輕輕地沖洗。