前面講了細(xì)胞分離技術(shù)方法和材料的使用酶、基本原代細(xì)胞分離、酶促細(xì)胞收獲等幾種，接下來(lái)一起看看艾美捷worthington方法和材料之用于細(xì)胞收獲的胰蛋白酶。

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1916?年，Rous?和?Jones?使用“Merck、Brubler?和?Kahlbaum?的胰蛋白酶粉末”消化活細(xì)胞在其中生長(zhǎng)的血漿凝塊，以獲得用于傳代培養(yǎng)的細(xì)胞懸液。1934?年，Vogelaar?和?Erlichman?是下一個(gè)研究人員，他們利用粗胰蛋白酶制劑中的消化酶來(lái)液化人成纖維細(xì)胞在傳代培養(yǎng)之前生長(zhǎng)的凝固血漿。Scherer、Syverton?和?Gey?于?1953?年引入了類(lèi)似于今天使用的胰蛋白酶技術(shù)，以收獲當(dāng)時(shí)新培養(yǎng)的?HeLa?細(xì)胞株，用于繼代培養(yǎng)和生化分析。這些工作人員測(cè)試了重結(jié)晶胰蛋白酶和?NF 1:250?胰蛋白酶的細(xì)胞收獲，發(fā)現(xiàn)純化的胰蛋白酶更有效，對(duì)細(xì)胞的毒性更小。盡管如此，NF 1：

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相對(duì)粗制的胰腺制劑如?NF 1:250?胰蛋白酶今天仍然用于細(xì)胞收獲，盡管它們表現(xiàn)出相當(dāng)大的批次間變異性并含有外來(lái)物質(zhì)和其他酶活性。粗胰蛋白酶中的雜質(zhì)會(huì)對(duì)細(xì)胞造成不必要的損害并降低克隆效率。使用更高純度的結(jié)晶胰蛋白酶可以消除許多這些困難。

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NF 1:250?材料中存在的任何污染物似乎都不是細(xì)胞收獲活性所必需的，因?yàn)榧兓囊鹊鞍酌笇?duì)單層解離非常有效，而粗制?NF 1:250?胰蛋白酶加大豆胰蛋白酶抑制劑無(wú)效。

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McKeehan?和Ham?報(bào)告說(shuō)，在低溫（即4°C）下用結(jié)晶胰蛋白酶收獲時(shí)，在低血清培養(yǎng)基中單細(xì)胞的活力和增殖潛力顯著提高。

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艾美捷worthington解離酶：胰蛋白酶

胰蛋白酶是一種胰腺絲氨酸蛋白酶，對(duì)涉及堿性氨基酸、精氨酸和賴(lài)氨酸的羧基的肽鍵具有特異性。胰蛋白酶是已知的特異性最高的蛋白酶之一，盡管它也表現(xiàn)出一些酯酶和酰胺酶活性。

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單獨(dú)純化的胰蛋白酶通常對(duì)組織解離無(wú)效，因?yàn)樗鼘?duì)細(xì)胞外蛋白幾乎沒(méi)有選擇性。純化的胰蛋白酶和其他酶如彈性蛋白酶和/或膠原酶的組合已證明對(duì)解離有效。

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“胰蛋白酶”也是商業(yè)供應(yīng)商對(duì)胰酶的名稱(chēng)，胰酶是從豬胰腺中提取的蛋白酶、多糖酶、核酸酶和脂肪酶的粗混合物。NF 1:250?是一種常用的“胰蛋白酶”制劑，在國(guó)家處方集規(guī)定的測(cè)定條件下，它具有蛋白水解消化?250?倍于其重量的酪蛋白的能力。重要的是要認(rèn)識(shí)到這種測(cè)定程序?qū)σ鹊鞍酌笡](méi)有特異性，盡管胰酶確實(shí)含有這種酶。盡管有命名法，但像?NF 1:250?和?1:300?這樣的粗“胰蛋白酶”被廣泛用于解離組織，這可能是因?yàn)橐鹊鞍酌负臀廴拘缘鞍姿夂投嗵敲富钚源_實(shí)會(huì)優(yōu)先攻擊細(xì)胞外基質(zhì)。然而，看來(lái)，

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在組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中，研究人員使用純化的胰蛋白酶將細(xì)胞從培養(yǎng)容器內(nèi)表面上生長(zhǎng)的單層釋放到懸浮液中。大多數(shù)源自正常組織且不高度適應(yīng)人工培養(yǎng)條件的細(xì)胞以單層形式生長(zhǎng)，即粘附在培養(yǎng)容器內(nèi)表面上的一層細(xì)胞厚度為一個(gè)細(xì)胞。由于此類(lèi)細(xì)胞更像正常組織中的細(xì)胞，因此許多組織培養(yǎng)研究人員正在研究在單層培養(yǎng)中生長(zhǎng)的細(xì)胞。

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單層培養(yǎng)物通常在玻璃或聚苯乙烯滾瓶、培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中生長(zhǎng)。用于組織培養(yǎng)工作的塑料容器經(jīng)過(guò)特殊處理，以確保細(xì)胞良好地粘附在容器壁上。有關(guān)細(xì)胞收獲的詳細(xì)討論，請(qǐng)參閱本指南的第?xv?頁(yè)。

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用于細(xì)胞分離程序的一些最常用的純化胰蛋白酶等級(jí)是?Worthington?代碼：TL、TRL、TRLS?和?TRLVMF。這些都適用于細(xì)胞收獲以及組織解離。

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Worthington專(zhuān)注于高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。其核心酶產(chǎn)品包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。艾美捷科技是Worthington的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。