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怎么使用DAPI進行染色

2022-10-09 13:30 作者:BIOFOUNT范德生物  | 我要投稿

1. DAPI染色實驗簡介:
當(dāng)使用DAPI與雙鏈DNA結(jié)合染色時,熒光強度可以提高約20倍。如果與單鏈DNA結(jié)合,則不會增強熒光。 DAPI的化學(xué)名稱為4,6-二mid基-2-苯基吲哚(4,6-二mid基-2-苯基吲哚)。 DAPI可以結(jié)合雙鏈DNA插槽,尤其是AT堿基,并且還可以在DNA序列中插入少于3個連續(xù)的AT堿基對。當(dāng)它與雙鏈DNA結(jié)合時,熒光強度可以增加約20倍。如果與單鏈DNA結(jié)合使用,熒光不會增加。因此,DAPI染色法是一種簡單,快速,靈敏的DNA檢測方法。實驗方法。盡管DAPI的熒光強度低于Hoechst,但其熒光穩(wěn)定性優(yōu)于Hoechst。其特異性高于溴化乙錠和碘化丙啶。

2. DAPI染色實驗所需的材料:
(1)0.01mol / L PBS(pH7.0):取34ml 0.1mol / L NaH2PO4?H2O,66ml 0.1mol / L Na2HPO4、0.9g NaCl溶解于900ml二次蒸餾水; (2)DAPI儲存溶液:將0.5mg DAPI溶于5ml PBS中,分裝,并在低溫下長時間保存; (3)DAPI工作液:用PBS稀釋DAPI儲存液至終濃度為0.1ug / ml。

3. DAPI染色實驗操作步驟:
(1)將培養(yǎng)的單層細胞(未固定)或新鮮組織等冷凍切片,用PBS沖洗5分鐘; (2)DAPI工作溶液在室溫下染色5-20分鐘(根據(jù)實驗材料而定)(取決于染色結(jié)果); (3)PBS沖洗; (4)水溶性貼片,游離細胞也可以直接用含DAPI的PBS貼片; (5)熒光顯微鏡觀察。

四、DAPI染色實驗所需試劑清單

序號產(chǎn)品名貨號CAS備注1PBS緩沖液HC2031

2磷酸氫二鈉:SS1345
3無水磷酸二氫鈉:SS1337
4氯化鈉:JT0001
5DAPI染色液:HC0622

以上為DAPI染色實驗所學(xué)的試劑,請選好優(yōu)質(zhì)試劑,以免造成實驗失敗。




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