寫在前面：細(xì)胞培養(yǎng)的常規(guī)步驟就包括細(xì)胞復(fù)蘇，細(xì)胞傳代和細(xì)胞凍存，本期內(nèi)容主要介紹一下細(xì)胞凍存；

細(xì)胞凍存的作用：將細(xì)胞置于-196°C液氮中低溫保存，使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)但仍然保持細(xì)胞特性，起到細(xì)胞保種的作用；在此過程中需要用到細(xì)胞凍存液，凍存管，凍存盒；

凍存液的配制（ 4°C冰箱放置，現(xiàn)配現(xiàn)用）

DMSO：血清=1:9

DMSO：血清：培養(yǎng)基=1:2:7

（DMSO：降低溶液冰點，并在緩慢凍結(jié)條件下，快速進(jìn)入細(xì)胞，使細(xì)胞內(nèi)水分透出，減少冰晶的形成，避免細(xì)胞損傷；）

細(xì)胞凍存步驟圖解

詳細(xì)步驟如下

• 取出培養(yǎng)的細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液，貼壁細(xì)胞的話，就需要進(jìn)行胰酶消化處理；

• 之后離心，去掉細(xì)胞培養(yǎng)基，有條件的實驗室，可對細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，一般細(xì)胞凍存的數(shù)量需要大于2E6個/mL；

• 計數(shù)后，使用凍存液重懸，比如你有1E7個細(xì)胞，按照2E6凍存，你就可以凍存5管，就需要加5mL凍存液重懸，但為了吹散細(xì)胞，通?？梢韵燃?mL凍存液，輕柔的把細(xì)胞吹散，再補(bǔ)足5mL混勻，之后分裝到凍存管中；

• 標(biāo)記①細(xì)胞名稱 ②凍存密度（≥2E6個/ml）③代次 ④培養(yǎng)基類型 ⑤凍存人姓名 ⑥凍存時間；

• 放入復(fù)溫的凍存盒，-80℃進(jìn)行降溫，暫存可放于-80℃，長期保存需要轉(zhuǎn)移至液氮罐；

細(xì)胞凍存的注意事項

細(xì)胞凍存液最好現(xiàn)配現(xiàn)用；

凍存細(xì)胞必須處在對數(shù)生長期，細(xì)胞活率大于90％；

凍存的細(xì)胞要保證無微生物污染，凍存前做支原體檢測；

細(xì)胞濃度控制在：1×10^6－2×10^7/ml，具體數(shù)量因細(xì)胞種類而異，太低的細(xì)胞濃度會影響后期細(xì)胞的復(fù)蘇；

最好使用程序降溫盒，每分鐘下降1℃，遵循“慢凍”原則；

凍存記錄要表明細(xì)胞的種類、凍存之前的狀態(tài)和大致數(shù)量、凍存時間和操作者；

凍存的細(xì)胞應(yīng)盡快轉(zhuǎn)入液氮，不要在-80℃冰箱放置超過兩個月；

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