流式考試
開(kāi)機(jī)
鞘液桶，廢液桶。鞘液桶：斷氣路線→上提排氣閥→開(kāi)蓋→加鞘液10 min→關(guān)蓋→連氣路線&鞘液線；廢液桶：斷廢液線&廢液感應(yīng)線→開(kāi)蓋→倒掉廢液30 min消毒→關(guān)蓋→連廢液線和廢液感應(yīng)線
開(kāi)穩(wěn)壓器。
開(kāi)流式細(xì)胞儀
開(kāi)電腦。賬號(hào)：Admin；密碼：BDIS#1
開(kāi)軟件FACSDiva。直接OK。
排氣。1）外部鞘液管路排氣：①按住接頭頂部，鞘液過(guò)濾器排氣（直至無(wú)氣泡），需要接液體。②放開(kāi)滾動(dòng)滑輪（儀器右后方），鞘液管路排氣（直至無(wú)氣泡），鎖緊滾動(dòng)滑輪（無(wú)液體流出），需要接收液體。2）內(nèi)部鞘液管路排氣：①流式管支撐臂放旁邊，取下有蒸餾水的流式管。②按PRIME排氣。③排氣完，STANDBY自動(dòng)亮（即待機(jī)），流式管放回去，支撐臂放正。
質(zhì)控（開(kāi)機(jī)十分鐘后質(zhì)控）
關(guān)機(jī)
洗。1）清洗進(jìn)樣針外管：支撐臂放一旁，進(jìn)樣針?lè)乓还? mL Clean液，吸入1 mL后再把支撐臂放正。2）清洗進(jìn)樣針及儀器管路：HI & RUN，高速運(yùn)行5-10 min。
Clean液換成Rinse液，重復(fù)前面操作。
蒸餾水洗。1）重復(fù)前面操作。2）1 mL蒸餾水的流式管放在支撐臂上，正位。選STANDBY（即待機(jī)）。
關(guān)閉FACSDiva軟件和電腦。File點(diǎn)Quit→關(guān)電腦電源
關(guān)流式細(xì)胞儀和穩(wěn)壓器
拉鞘液桶放氣閥，排氣
流式實(shí)驗(yàn)所需設(shè)備和試劑
離心機(jī)；移液槍；渦旋混勻器；300目篩網(wǎng)；流式管；5 mL試管架；PBS溶液和蒸餾水：0.22 μm過(guò)膜；Clean清洗液；多聚甲醛
雙色淋巴細(xì)胞亞群試驗(yàn)的獲取和分析
樣品制備：100 μL抗凝全血加到管底（不碰壁）→20 μL 熒光素標(biāo)記的抗體，混勻→室溫避光孵育15-30 min→10倍稀釋的紅細(xì)胞裂解液2 mL，混勻→室溫避光10 min→300g離心5 min，去掉上清液→+2 mL PBS混勻，離心去上清→0.5 mLPBS混勻，4℃避光，1h內(nèi)上機(jī)檢測(cè)；不及時(shí)上機(jī)要加0.5 mL 2%多聚甲醛，4℃保存，48 h內(nèi)檢測(cè)
【注意事項(xiàng)】1.一次性倒掉上清液；2.2-8℃保存抗體。避光。
上機(jī)檢測(cè)
Browser里點(diǎn)建文件夾，實(shí)驗(yàn)，樣本，管（重命名）→Inspector里選中管，點(diǎn)Cytometer的Parameters，刪除不要的熒光參數(shù)→散射光參數(shù)（FSC，SSC）選線性，熒光參數(shù)選對(duì)數(shù)，參數(shù)均選A面積信號(hào)（A默認(rèn)勾選，如果需要去黏連，FSC和SSC還需勾選H和W）→Global/work sheet1畫兩圖（①FSC-A，SSC-A，不規(guī)則P1；②FITC-A，PE-A，象限門→選中象限門，右鍵Show population選P1→右鍵選Show populaion hierarchy（顯示各個(gè)百分比）→右鍵選Creat? statistics view
