Scorpion? 探針是一種包含發(fā)夾環(huán)引物和 PCR 阻斷劑的 PCR 探針。 發(fā)夾環(huán)引物在其與目標序列退火期間被修改，允許從報告器發(fā)射熒光。

Scorpion? 引物：“U”型發(fā)夾環(huán)引物，包含一個淬滅基團和一個熒光報告基團。由于這種環(huán)狀結(jié)構(gòu)，淬滅基團靠近熒光報告基團淬滅其熒光。它還包括與 目標序列。

PCR 阻斷劑：一種己二醇 (HEG) 單體，用于在相反鏈的延伸過程中防止通讀。

圖 1. Scorpion? 探針由 PCR 阻斷劑和與探針相連的 Scorpion? 引物組成。

Scorpion? 探頭如何工作？

在擴增循環(huán)期間，Scorpion? 引物中的環(huán)結(jié)構(gòu)被打開。 這允許內(nèi)部序列與目標序列雜交，并將淬滅劑與熒光報告基因分開。

最后，這種分離讓報告器發(fā)出熒光。

PCR 阻斷劑位于淬滅劑的 3' 方向下游。 它用于防止在相反鏈的延伸過程中發(fā)生通讀。 如果讀取相反的鏈，則淬滅劑可能與報告基因分離，這將導(dǎo)致假熒光。

圖2. 探針與序列結(jié)合，引物被延伸。 變性后，探針打開。 這導(dǎo)致報告基因和猝滅劑分離，然后報告基因發(fā)出熒光。

Scorpion? 探針是專為 qPCR 設(shè)計的高靈敏度、序列特異性、雙標記熒光探針/引物雜交體。 與許多先進的探針一樣，該探針的一個主要缺點是寡核苷酸設(shè)計復(fù)雜。