腫瘤干細(xì)胞是是一群既具有自我更新能力又具有較強(qiáng)的侵襲遷移的細(xì)胞，對(duì)腫瘤的存活、增殖、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)有著重要作用。腫瘤細(xì)胞的成球?qū)嶒?yàn)（成球大小及數(shù)目）是衡量腫瘤細(xì)胞干性的金標(biāo)準(zhǔn)。

成球能力是腫瘤干細(xì)胞體外鑒定的一個(gè)重要方法。其判斷的是單個(gè)細(xì)胞在合適的條件培養(yǎng)基中自我更新的能力，一般用細(xì)胞球形成效率（Sphere Formation Efficiency，SFE）表示。

SFE的計(jì)算方法：SFE=每孔中直徑大于75um的細(xì)胞球的個(gè)數(shù) / 每孔中原始接種細(xì)胞的總數(shù)

通常情況下，需要檢測(cè)細(xì)胞連續(xù)傳代后的自我更新能力，此時(shí)就需要進(jìn)行細(xì)胞球的傳代。方法是，70μm的細(xì)胞篩收集培養(yǎng)10-14天后的細(xì)胞球，使用胰酶消化成單細(xì)胞，將合適數(shù)量的細(xì)胞鋪入96孔板繼續(xù)進(jìn)一步培養(yǎng)10-14天，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞球的個(gè)數(shù)，計(jì)算SFE。

實(shí)驗(yàn)步驟

01

?一次成球

1. 將狀態(tài)良好的細(xì)胞消化后離心收集，去除含血清培養(yǎng)基。

2. PBS清洗細(xì)胞2次。

3. 細(xì)胞計(jì)數(shù)，用超低吸附的細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細(xì)胞（6孔板中每孔加入大約1000個(gè)細(xì)胞）。

4. 培養(yǎng)大約10天，觀察細(xì)胞成球情況并計(jì)算SPF。

02

?二次成球

1. 70μm的細(xì)胞篩過(guò)濾收集細(xì)胞球，胰酶消化。

2. 無(wú)血清培養(yǎng)基終止消化，PBS清洗細(xì)胞2次。

3. 重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)。

4. 用超低吸附的細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細(xì)胞（6孔板中每孔加入大約1000個(gè)細(xì)胞）。

5. 培養(yǎng)大約10天，觀察細(xì)胞成球情況并計(jì)算SPF。

Hisham F. Bahmad,，Katia Cheaito,1，Reda M. Chalhoub，etal. 2018

標(biāo)尺100 μm