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Annexin V——檢測(cè)細(xì)胞的靈敏指標(biāo)

2022-02-18 16:14 作者:艾美捷  | 我要投稿

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一,它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。在正常細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),而在細(xì)胞凋亡早期,細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。

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AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS高親和力特異性結(jié)合。Annexin V作為一種磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,它通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V是檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)。

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艾美捷/Annexin V?是一種磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,它通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合,是檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)。

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艾美捷/Annexin V組成成分:

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艾美捷/Annexin V建議的染色方案:

1.在冷PBS中清洗細(xì)胞兩次

2.在冷1X ApoScreen?中重新使用電池膜聯(lián)蛋白結(jié)合緩沖液(SB目錄號(hào)10045-01)濃度為1 x 106細(xì)胞/mL

3.加100mL細(xì)胞懸液至5mL聚苯乙烯圓底管

4.加10m共軛ApoScreen?Annexin V

5.輕輕旋轉(zhuǎn)每根試管,在2-8°C溫度下培養(yǎng)15分鐘,并避光

6.在不清洗的情況下,添加~380m冷1X ApoScreen?Annexin?結(jié)合緩沖液到每根管

7.加10mApoScreen?的L7-氨基放線菌素D(7-AAD;SB分類號(hào)10042-01)或ApoScreen?碘化丙啶(PI;SB類別號(hào)。

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艾美捷/Annexin V儲(chǔ)存方式:

1.純化的(UNLB)ApoScreen?Annexin V?以0.1mg純化的重組蛋白形式從PBS中凍干。儲(chǔ)存材料在重構(gòu)前的-20°C溫度下。用1.0毫升的dH2O重新配制。將再造材料儲(chǔ)存在2-8°C的溫度下。

2.熒光素(FITC)、生物素(BIOT)和菁5(CY5)ApoScreen?附錄V結(jié)合物在1.0毫升的溶液中作為100次試驗(yàn)提供ApoScreen?Annexin V?結(jié)合緩沖液。在2-8°C下儲(chǔ)存。

3.R-藻紅蛋白(PE)和別藻藍(lán)蛋白(APC)ApoScreen?在1.0毫升PBS/NaN3中,以100次試驗(yàn)的形式提供膜Annexin V結(jié)合物和穩(wěn)定劑。在2-8°C下儲(chǔ)存。不要冷凍!

4.保護(hù)熒光色素結(jié)合物不受光照。如果按照指示儲(chǔ)存,試劑在標(biāo)簽上顯示的時(shí)間內(nèi)是穩(wěn)定的。


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