抗精子免疫性不育癥動物模型【北京動物實驗】

【造模機制】男性免疫不育癥診斷上以不育男性的血清和精漿中發(fā)現(xiàn)抗精子抗體為依據(jù)。實驗研究是以主動免疫法建立血清或生殖道局部抗精子抗體(AsAb)動物模型。

【造模方法】

1.動物和試劑 NIH 雄鼠。酶標儀、離心機。0.5%NP-40、生理鹽水、考馬斯亮藍,弗氏佐劑、ELISA 試劑盒。

2.模型制備取常規(guī)檢查正常的人精液 40 份,離心 30 分鐘,棄精漿,精子用生理鹽水洗滌5次,然后加入 0.5%NP-40,震蕩 2 小時,離心 20 分鐘,取上清液加生理鹽水,4℃透析,適當濃縮后,行考馬斯亮藍法測定蛋白濃度。取 8 周齡 NIH 雄鼠,用上述提取的精子膜抗原伴弗氏完全佐劑,對小鼠進行腹腔免疫,每只小鼠注射抗原量為 100pug,2 周后用弗民不完全佐劑抗原加強免疫1 次,每只小鼠性射抗原量為 150μg,隔 1 周后以精子生理鹽水抗原再加強免疫 1 次,每只小鼠注射抗原量為 150μg。

3.觀察指標應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清 AsAb。小鼠免疫前 ELISA 法測定血清AsAb,所有吸光值均接近 0。免疫后若 AsAb 測定結(jié)果為陽性,則造模成功。

【模型特點】小鼠免疫前 ELISA 法測定血清 AsAb,所有吸光值均接近0。免疫后(造模后)AsAb 測定結(jié)果為陽性。

【應(yīng)用范圍】以主動免疫法建立血清或生殖道局部 AsAb 動物模型,是進行中醫(yī)藥預(yù)防,治療及其作用機制研究的主要方法。模型成功建立后,對小鼠灌胃給藥數(shù)天。之后若發(fā)現(xiàn)血清 AsAb 的水平有顯著下降,或出現(xiàn)陽轉(zhuǎn)陰,則認為該藥物有效。

【注意事項】不育的原因非常復(fù)雜,其中抗精子抗體是免疫性不育的主要原因。研究發(fā)現(xiàn)不育癥中 20％～40％是由免疫原因引起的。抗精子抗體主要影響精子的活動,從而大大降低受孕的機會。因此,消除抗體和抑制抗體的產(chǎn)生,是治療抗精子免疫性不育癥的關(guān)鍵。

【模型評價】以主動免疫法建立血清或生殖道局部 AsAb 抗精子抗體動物模型是目前應(yīng)用廣泛的模型。實驗操作簡單,酶聯(lián)免疫吸附檢測效率高,造模的成功率也高。是較為理想的研究抗精子免疫性不育癥的模型。

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