61天高考 進(jìn)階簡易版

浙科.限制性內(nèi)切核酸酶

人教.限制性核酸內(nèi)切酶 外切酶.DNA水解酶

DNA連接酶

1）大腸桿菌的限制酶EcoR I

質(zhì)粒（較小環(huán)狀DNA分子）

1）復(fù)制起點(diǎn) 獨(dú)立自主復(fù)制+穩(wěn)定存在

2）啟動(dòng)子：與RNA聚合酶結(jié)合

終止子：終止轉(zhuǎn)錄的過程

目的基因的起/終點(diǎn) 幫助目的基因的表達(dá)

表達(dá)載體.使目的基因擴(kuò)增及表達(dá)出蛋白質(zhì)

包含轉(zhuǎn)錄和翻譯的信號(hào)

克隆載體.大量擴(kuò)增外源DNA 無啟動(dòng)/終止子 （克隆即復(fù)制）

3）標(biāo)記基因

抗性基因 eg.amp氨芐青霉素抗性基因和

tet四環(huán)素抗性基因(r標(biāo)沒寫)

【質(zhì)粒上有啟動(dòng)/終止子.復(fù)制起點(diǎn).標(biāo)記基因.多個(gè)限制酶識(shí)別序列】

刷題

1.每個(gè)大腸桿菌細(xì)胞至少含一個(gè)重組質(zhì)粒 ，一個(gè)（限制性內(nèi)切核酸酶的）識(shí)別位點(diǎn) 要一個(gè)目的基因就足夠了 每個(gè)目的基因至少要表達(dá)一個(gè)...分子

這是成功表達(dá)....酶的必要前提

2.PCR不用解旋酶，只用Taq耐高溫DNA聚合酶

結(jié)合textbook了?將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

制備感受態(tài)細(xì)胞再轉(zhuǎn)入外源DNA

（低溫，低濃度）CaCl2溶液→造成細(xì)胞膨脹，細(xì)胞膜通透性改變→短暫熱刺激

評(píng)論區(qū)答疑

Q：dna探針是老教材的嗎，和dna分子雜交有什么不一樣嗎——　吹雪君

A：DNA探針是最常用的核酸探針，核酸分子雜交利用核酸探針，檢測特異的核苷酸序列。核酸探針是帶有放射性或熒光標(biāo)記的具有特定核苷酸序列的DNA或RNA。

同理，DNA分子雜交也是常用的核酸分子雜交之一，核酸分子雜交可以檢測受體細(xì)胞是否還有目的基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA。

以及額外的PCR檢測（電泳／DNA測序檢測PCR產(chǎn)物）和抗原抗體雜交技術(shù)（蛋白質(zhì)）檢測

四者都是檢測目的基因是否表達(dá)成功的方法。

持續(xù)更新，爭做李林老師的課代表doge．

制作不易，支持一下

我也做了第10章 生態(tài)學(xué) （4）生態(tài)學(xué)綜合的筆記，不過優(yōu)先更基因工程