細胞學(xué)堂 | 如何解決懸浮細胞培養(yǎng)異常
懸浮細胞大多胞體呈圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長，容易大量繁殖。懸浮細胞培養(yǎng)雖比貼壁細胞少了消化的步驟，但培養(yǎng)起來同樣不易。有碎片、形態(tài)改變、生長速度慢、細胞貼壁……每一種異常都牽動著我們的心。
因此本期細胞學(xué)堂整理了懸浮細胞收貨和培養(yǎng)過程中的常見問題，并針對各個問題列出解決辦法，帶你逐個擊破！
運輸常見問題及處理方法
1
碎片多
處理方法：懸浮細胞受到運輸或者其他因素導(dǎo)致細胞損傷時，容易產(chǎn)生細胞碎片，碎片可通過低速離心（800~1000rpm，3min）去除；低速離心同時也會丟失細胞，故細胞密度低的時候不適用，細胞密度低時應(yīng)正常轉(zhuǎn)速離心，保留細胞優(yōu)先。
2
細胞不圓/形態(tài)變了/聚團
處理方法：懸浮細胞受到運輸或者微環(huán)境變化影響時，可能出現(xiàn)變形，聚團等現(xiàn)象，在使用正確培養(yǎng)基和操作都正確的情況下，一般繼續(xù)培養(yǎng)一周左右可以恢復(fù)原狀。
培養(yǎng)過程常見問題及處理方法
1
細胞不圓/形態(tài)變了/聚團
處理方法如下：
少量細胞聚團、呈葡萄串狀，屬于正常現(xiàn)象，特別是細胞密度較低時，易出現(xiàn)這種情況。通過靜養(yǎng)（少操作，少觀察） 、補加血清（5%）等方式，讓細胞密度增高逐漸適應(yīng)環(huán)境后可以恢復(fù)正常；
血清品牌會影響細胞生長狀態(tài)，如果一種不會聚團的細胞，養(yǎng)出來全部聚團，分散的細胞很少，這時候要考慮血清的影響。
2
細胞生長慢或不生長
處理方法：懸浮細胞有密度依賴性，在高密度下狀態(tài)比較好，低密度時狀態(tài)較差，所以傳代比例要控制，細胞狀態(tài)不好時，傳代可以不用離心法，而是補液或者半換液的方式，以避免離心損失細胞。
3
細胞發(fā)生貼壁
處理方法如下：
細胞培養(yǎng)瓶靜置時間太長，細胞沉底后會出現(xiàn)少量貼壁現(xiàn)象，但這種貼壁非常松，吹一下或拍一下細胞就可以起來；此現(xiàn)象為正?，F(xiàn)象，無需特殊處理。
如果細胞貼的非常緊，形態(tài)已經(jīng)變成類似于上皮樣時，需考慮是否為細胞特性或者有其他因素刺激導(dǎo)致；
日常操作避免染菌以及使用優(yōu)質(zhì)血清是預(yù)防懸浮細胞貼壁的有效方法。
培 養(yǎng) 小 貼 士
懸浮細胞常規(guī)推薦接種密度：3-5×105cell/mL，生長到2×106cell/mL左右可繼續(xù)傳代；該密度建議為理論值，實際按照每個細胞特性有波動；
培養(yǎng)懸浮細胞需要穩(wěn)定的生長環(huán)境，少操作，少觀察，更有利于細胞生長；
不建議將聚團的細胞頻繁吹散，等待密度高和狀態(tài)改善時，細胞會自行散開；部分細胞聚團生長為特性，吹散不利于生長，請注意查看相關(guān)培養(yǎng)說明；
有些細胞本身就是聚團生長(NK92,NK92MI,JURKAT,H209,ATT20等)，有些細胞本身就形態(tài)不圓（H9等），為正?，F(xiàn)象，無需特殊處理；
豎瓶培養(yǎng)可以促進細胞生長，但由于拿出來觀察時都是橫瓶，觀察久了細胞會貼到底部，觀察完再次豎起來就會有細胞掛在瓶底部，而細胞沒有培養(yǎng)基滋潤很快就會死掉并殘留在壁上，從而導(dǎo)致養(yǎng)著養(yǎng)著細胞越來越少，貼壁細胞越來越多；因此，在培養(yǎng)瓶豎置操作時需注意吹下培養(yǎng)瓶底部的細胞，避免細胞殘留。
