系統(tǒng)性紅斑狼瘡樣動物模型【疾病動物模型】

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)的病因不明確，治療后病情易反復(fù)發(fā)作，有一定的致死率。一般認(rèn)為遺傳、環(huán)境、性激素、感染等相互作用致本病發(fā)生，其中遺傳因素占主要地位。系統(tǒng)性紅斑狼瘡樣小鼠模型(mice model of systemic lupus erythema-tosus)是研究本病病因、發(fā)病機制及臨床開發(fā)新的治療手段必不可少的工具。

（一）自發(fā)性動物模型

BXSB小鼠是近年培育出的一種成熟的SLE的模型鼠之一。不僅常染色體基因有異常,且Y染色體上有 Yaa 基因(Y chromosome-liked autoimmune accelerator),可在特異環(huán)境內(nèi)誘發(fā)并加重病情，所以雄性小鼠較雌性小鼠發(fā)病早且嚴(yán)重。其主要表現(xiàn)為外周淋巴器官中高度活化B淋巴細(xì)胞異常增多，而產(chǎn)生高丙種球蛋白血癥和多種自身抗體，腎病理以膜性增生性腎小球腎炎為特征。

MRL/Ipr是另一種常用的SLE自發(fā)性動物模型，MRL/Ipr小鼠的癥狀與人類紅斑狼瘡相似。MRL/1pr 小鼠由美國Jackson實驗室的Murphy 和 Roths在1978年培育成功，該鼠由 LG/J、AKR/J、C3H/D及C57BL/6幾種不同品系小鼠經(jīng)過一系列復(fù)雜的雜交至第 12代時產(chǎn)生，同種抗原和表型為 H-2*,lyt-1.2+,lyt-3.1+,lyt-1.2+TLT。MRL/Ipr 小鼠的基因來自LG/J小鼠75%，AKR/J小鼠12.6%,C3H/D小鼠12.1%,C57BL/6小鼠 0.3%,MRL/Ipr含有與細(xì)胞自發(fā)性程序性死亡有關(guān)的Fas基因隱性突變，出現(xiàn)淋巴細(xì)胞增生基因，導(dǎo)致T細(xì)胞增生，全身淋巴結(jié)腫大，加速了自身免疫反應(yīng)，出現(xiàn)侵蝕性關(guān)節(jié)炎，抗 DNA、抗Sm、抗 Su、抗核苷P抗體、高滴度抗核抗體（ANA）、高丙種球蛋白血癥、半數(shù)出現(xiàn)類風(fēng)濕因子（RF）。腎臟損害為亞急性增生性腎小球腎炎，輕中度蛋白尿，發(fā)病無性別優(yōu)勢，其50%死亡率發(fā)生于第5個月。

Helyer 最早發(fā)現(xiàn)近交系新西蘭黑鼠和新西蘭白鼠雜交第一代小鼠 NZB/NZW FI （BW）小鼠是與人類SLE最相似的狼瘡性腎炎模型，這是一種與遺傳有關(guān)、純系鼠世代相傳的自發(fā)性SL.E小鼠，該模型鼠的B細(xì)胞和T細(xì)胞系統(tǒng)都有異常，可產(chǎn)生高滴度的IgG 型抗ds-DNA 抗體，最終導(dǎo)致腎小球腎炎；唯性比雄性起病早且病情重，性激素對 BW有明顯影響，雌激素則使病情惡化。自發(fā)性品系SLE2個月齡小鼠，血中抗ds-DNA 無明顯升高，在4~5個月齡時可見明顯升高；BW小鼠多自2個月齡起陸續(xù)死于腎衰竭。該品系小鼠一般發(fā)病在3~4個月齡左右，隨著月齡的增加，癥狀逐漸加重。

（二）誘發(fā)性動物模型

【造模機制】同種異體淋巴細(xì)胞能誘導(dǎo)自身抗體產(chǎn)生，其自身抗體來自宿主自身。用親代BALB/c鼠淋巴細(xì)胞輸人F1鼠后，經(jīng)過4個月動態(tài)觀察，能誘導(dǎo)抗 ds-DNA 抗體與抗組蛋白抗體的顯著升高，并出現(xiàn)免疫復(fù)合物性腎炎等病理變化。

【造模方法】選用BALB/c小鼠。儀器藥品：熒光顯微鏡、酶標(biāo)儀、0.5%臺盼藍(lán)、Hank’s液等。模型制作：

1.淋巴細(xì)胞分離 無菌條件下，取出 BALB/c鼠脾、淋巴結(jié),分離淋巴細(xì)胞,Hank's液洗滌3次,0.5%臺盼藍(lán)檢查細(xì)胞活力大于 95%，調(diào)整細(xì)胞懸液至所需濃度。

2.同種異體淋巴細(xì)胞輸注 將已分離調(diào)整好濃度的 BALB/c 鼠淋巴細(xì)胞分別經(jīng)靜脈途徑和經(jīng)腹腔途徑輸人未經(jīng)照射過的同性別、同齡F1小鼠體內(nèi)。50×10°/次，2次，間隔 1周。同齡未照射未輸入淋巴細(xì)胞的F1小鼠為對照。每組小鼠于輸注前用細(xì)塑料管經(jīng)后眼眶靜脈取血，每次約0.1ml，以后每2周采血一次至16周。離心分離血清存放一30℃統(tǒng)一測定。輸注淋巴細(xì)胞后第 16 周,小鼠處死取腎。

3.模型檢測 抗ds-DNA抗體和抗組蛋白抗體和用 ELISA方法或間接免疫熒光法檢測。取腎組織進(jìn)行組織學(xué)觀察和免疫組化。

【模型特點】經(jīng)腹腔途徑輸入的F1小鼠，能夠誘導(dǎo)出現(xiàn)抗ds-DNA 抗體水平升高。小鼠第2周已出現(xiàn)抗 ds-DNA抗體的升高，至第6周出現(xiàn)峰值，以后緩緩降低，維持異常水平至第12周，第14周后降至正常范圍內(nèi)。F1經(jīng)靜脈途徑輸入后，第2周也出現(xiàn)抗 ds-DNA 抗體升高，第8周出現(xiàn)高峰，以后有所降低，但持續(xù)異常至第16周。腎組織學(xué)及免疫組化觀察，第16周時，實驗組鼠出現(xiàn)腎小體和間質(zhì)血管旁程度不等單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞漫潤。腎小球基底膜增厚且厚薄不勻，間質(zhì)細(xì)胞增生。免疫組化示腎小球基底膜及毛細(xì)血管內(nèi)皮區(qū)域有 IgG細(xì)胞復(fù)合物沉著，呈顆粒狀。

【注意事項】實驗中活化淋巴細(xì)胞時應(yīng)注意使脾淋巴細(xì)胞活化前后細(xì)胞存活率>95%，模型的制備要使用清潔級以上 BALB/c小鼠，飼養(yǎng)在無菌包中。一般飼養(yǎng)環(huán)境易造成發(fā)病時間不一致，發(fā)病率不穩(wěn)定，病變輕重程度不一。另外，近年由于SLE自發(fā)性模型的增加與成熟，誘發(fā)性模型的使用有所減少。應(yīng)根據(jù)實驗需要選擇合適的動物模型。

【應(yīng)用范圍】該模型對于闡明自身抗體產(chǎn)生的具體機制，研究免疫反應(yīng)范圍基因及自身抗體的致病性等具有廣闊的應(yīng)用前景。

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