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百螢問(wèn)號(hào)之鈣黃綠素藍(lán),AM適用儀器有哪些

2023-05-29 10:07 作者:百螢生物  | 我要投稿

? ? ? 百螢鈣黃綠素藍(lán),AM是鈣黃綠素藍(lán)的細(xì)胞滲透性版本。進(jìn)入活細(xì)胞后,弱熒光鈣黃綠素,AM被水解成鈣黃綠素,其激發(fā)/發(fā)射最大值與鈣黃綠素藍(lán)、DAPI、HOECHST和AMCA相似。這種與典型的綠色和紅色熒光團(tuán)(如FITC、TMR和德克薩斯紅)的特殊光譜分離為多重實(shí)驗(yàn)提供了額外的選擇。

1.百螢鈣黃綠素,AM適用儀器

?

流式細(xì)胞儀

Ex(nm) :? ? ? ??350/405納米激光

Em(nm):? ? ?? 450/40納米過(guò)濾器

儀器規(guī)格?:? ???Pacific Blue Channel

?

?熒光顯微鏡

Ex(nm) :? ? ? ?DAPI過(guò)濾器集

Em(nm): ??????DAPI過(guò)濾器集

推薦孔板: ????黑壁/清底

?

?熒光酶標(biāo)儀

Ex(nm):? ? ? ? 360

Em(nm) :???????450

Cutoff :? ? ? ? ? 420

推薦版塊: ?????黑壁/清底

儀器規(guī)格: ?????底讀模式


2.?百螢鈣黃綠素,AM工作溶液的制備

? ? ?在您選擇的緩沖液(例如Hanks和Hepes緩沖液)中制備1至10μM的鈣黃綠素藍(lán),AM工作溶液。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系,建議使用終濃度為4至5μM的鈣黃綠素藍(lán),AM溶液。細(xì)胞加載所需的指示劑的確切濃度必須根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。

注意:如果您的細(xì)胞含有有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,則可以將丙磺舒(1-2.5mM)或磺吡酮0.1-0.25mM添加到工作溶液中以減少去脂化指示劑的泄露。

?

3.?百螢鈣黃綠素,AM樣本實(shí)驗(yàn)方案

(1)準(zhǔn)備用于成像的細(xì)胞;

(2)去除細(xì)胞培養(yǎng)基并用無(wú)血清緩沖液洗滌細(xì)胞一次以去除任何剩余的培養(yǎng)基;

注意:細(xì)胞培養(yǎng)基中的血清可能含有脂酶活性,這會(huì)增加背景干擾。

(3)將鈣黃綠素藍(lán),AM工作溶液添加到培養(yǎng)物中;

(4)在37℃下孵育細(xì)胞30-60分鐘;

(5)用HHBS或您選擇的緩沖液(包含陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑,如1mM丙磺舒)替換染料工作溶液,以去除任何多余的探針;

(6)使用配置DAPI過(guò)濾器組的熒光顯微鏡、配置UV/紫激光和450/40nm過(guò)濾器(Pacific Blue Channel)的流式細(xì)胞儀或Ex/Em=360的熒光板讀取器測(cè)量熒光強(qiáng)度/450納米截止420納米。

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? ? 以上是百螢整理的鈣黃綠素藍(lán),AM在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中適用的儀器,工作溶液的配置以及樣本實(shí)驗(yàn)方案,希望對(duì)正在做實(shí)驗(yàn)或者準(zhǔn)備做實(shí)驗(yàn)的朋友有所幫助。


百螢問(wèn)號(hào)之鈣黃綠素藍(lán),AM適用儀器有哪些的評(píng)論 (共 條)

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