Flipper-TR探針如何檢測熒光壽命變化？

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熒光Flipper-TR?探針通過特異性靶向細胞質膜，并通過其熒光壽命變化來反映膜張力變化。Flipper-TR?自發(fā)地插入細胞的質膜中，并且僅在插入脂質膜時才會激發(fā)熒光。探針通過機械載體上的兩個扭曲的二硫噻吩之間的扭轉角和J化改變來感知脂質雙層膜結構的變化（參見圖5）。當處于緊張狀態(tài)時（二硫噻吩并排），發(fā)射壽命更長（4.1-8.0ns），而在松弛狀態(tài)下（二硫噻吩扭曲），發(fā)射壽命短（2-4ns）。方差（cv）約為0.3ns（cv = 4-15％），這允許在分辨率細微變化的情況下進行高分辨率分析，在FLIM成像過程中，可將熒光壽命的差異通過時間來展示，一般來說，較短的壽命為綠色，中等壽命為黃色，較長的壽命為橙色和紅色

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Flipper-TR的結構和張力檢測機制示意圖

左邊：Flipper-TR的基本分子結構

右邊：Flipper-TR低張力時扭曲（綠色）和高張力時并列排布（紅色）

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這些探針的濾光片組件是什么？

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Flipper-TR探針使用長分離濾光片組進行可視化，因為其激發(fā)峰值比發(fā)射峰值短100 nm以上。因此，理想的濾光片組是488 +/- 20nm的激發(fā)波長和575-675 +/- 40nm的發(fā)射波長（圖3）。時間分辨測量方法允許非常低的背景，它在水性環(huán)境中具有低熒光。

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Flipper-TR探針在諸如組織培養(yǎng)基或固定緩沖液等水環(huán)境中的背景非常低，因為它是完全扭曲的狀態(tài)，容易形成膠束并自我淬滅（參考文獻3）。插入膜后，其扭曲度變小，開始發(fā)出高熒光。

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艾美捷Flipper TR膜張力傳感器為研究者們提供了一種快速測量體內膜張力變化的新穎、靈敏、可靠、無創(chuàng)的研究工具。