Hoechst 33342 Staining Dye Solution 是一種用于在熒光顯微鏡下標(biāo)記 DNA 的熒光染料。 該產(chǎn)品可用于熒光顯微鏡、微孔板、比色皿和流式細胞儀應(yīng)用。 它還可用于通過繪制標(biāo)準(zhǔn)排放-含量曲線來檢測樣本 DNA 的含量。

hoechst 33342染色原理

Hoechst 33342 滲透細胞膜并與富含 A/T 的 dsDNA 序列的小溝結(jié)合，從而優(yōu)先染色細胞核。

Hoechst 33342 (in blue) binding dsDNA.

hoechst 33342染色步驟

1. 將熒光染料（Hoechst 33342、AO、PI 或 EB）以合適濃度直接添加到細胞培養(yǎng)基中。

2. 將細胞孵育 5 分鐘。

3. 在倒置熒光顯微鏡下直接觀察細胞。

如果需要，在對轉(zhuǎn)染細胞進行重要染色后修復(fù)細胞，以進一步詳細分析形態(tài)：

1.用PBS清洗細胞（此步驟可省略），然后用4%（w/v）多聚甲醛或1%（v/v）戊二醛室溫固定細胞5分鐘。

2. 用 PBS 清洗細胞。

3. 將樣品用 PermaFluor 水性封固劑封固，并在配備適當(dāng)濾光片的熒光顯微鏡下檢查細胞。

洗滌應(yīng)盡可能輕柔，以盡量減少死細胞的損失。

Hoechst 33342 激發(fā)/發(fā)射光譜

當(dāng)與 dsDNA 結(jié)合時，Hoechst 33342 在紫外范圍 (350 nm) 內(nèi)具有最大激發(fā)波長，并且染料可以在最大發(fā)射波長 461 nm 的藍色通道中被最佳檢測（圖 2）。 Hoechst 33342 在激發(fā)和發(fā)射波長之間具有特征性的寬斯托克斯位移，當(dāng)需要良好的光譜分離以減少熒光干擾時，例如在免疫熒光顯微鏡的染色質(zhì)復(fù)染中，這種染料是最佳選擇。

Hoechst 33342 激發(fā)和發(fā)射光譜。 最大激發(fā)波長為 350 nm（藍色），最大發(fā)射波長為 461 nm（紅色）。