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FITC-NHS;綠色熒光素標(biāo)記活性脂;FITC-活化酯/N-羥基琥珀酰亞胺

2023-05-18 09:14 作者:齊岳創(chuàng)科  | 我要投稿

FITC標(biāo)記蛋白方法:

(1)將待交聯(lián)的蛋白(濃度≥1mg/mL)對交聯(lián)反應(yīng)液透析三次4℃,至pH=9.0。交聯(lián)反應(yīng)液配制方法:7.6gNaHCO3,1.06gNa2CO3,7.36gNaCl,加水定容至1L。

(2)將FITC溶于DMSO中,濃度為1mg/mL。每次交聯(lián)使用的FITC均應(yīng)新鮮配制,避光。

(3)按P:F(蛋白質(zhì):FITC)=1mg:150μg的比例將FITC緩慢加入于抗體溶液中,邊加邊輕輕晃動使其與抗體混合均勻,暗處4℃反應(yīng)8h。

(4)加入5mol/L的NH4CL至終濃度50mmol/L,4℃終止反應(yīng)2h。

(5)將交聯(lián)物在PBS中透析四次以上,至透析液清亮。

(6)交聯(lián)物的鑒定

蛋白濃度(mg/mL)=[A280-0.31×A495]/1.4

F/P比例:3.1×A495/[A280-0.31×A495],該值應(yīng)介于2.5~6.5之間。

(7)FITC交聯(lián)的蛋白應(yīng)置于Ph7.4的磷酸鹽緩沖液中,加入0.1%NaN3、1%BSA,4℃避光保存。

FITC異硫氰酸熒光素是一種黃色粉末狀的熒光染料,激發(fā)波長為494 nm左右,具有高吸收率、優(yōu)良的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性等特點。

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QY小編zyl2023.5.18

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