国产精品天干天干,亚洲毛片在线,日韩gay小鲜肉啪啪18禁,女同Gay自慰喷水

歡迎光臨散文網(wǎng) 會(huì)員登陸 & 注冊(cè)

質(zhì)粒提取實(shí)驗(yàn)避坑指南

2021-08-12 09:45 作者:Cas9X海星生物  | 我要投稿

相信大部分同學(xué)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室第一接觸的實(shí)驗(yàn)就是質(zhì)粒提取,雖然質(zhì)粒提取實(shí)驗(yàn)相對(duì)簡(jiǎn)單,但是還是有很多問題需要我們提防和解決的,今天小海星就為大家簡(jiǎn)單介紹一下質(zhì)粒提取實(shí)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)中常遇到的一些問題。?

質(zhì)粒是攜帶外源基因進(jìn)入細(xì)菌中擴(kuò)增或者表達(dá)的重要媒介,常用的方法有煮沸裂解法、堿提法等。而我們常用的?kit 是采用堿提法

不同品牌的試劑盒具體操作步驟可能不同,但這個(gè)萬變不離其宗,基礎(chǔ)知識(shí)點(diǎn)還是不變的。菌體在強(qiáng)堿性條件下裂解,釋放出包括質(zhì)粒在內(nèi)的核酸,蛋白等物質(zhì)。pH恢復(fù)中性時(shí),共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒 DNA 復(fù)性快,而線性的染色體 DNA 復(fù)性緩慢,細(xì)菌蛋白質(zhì)、破裂的細(xì)胞壁和變性的染色體 DNA 會(huì)相互纏繞成大型復(fù)合物,而后者被十二烷基硫酸鹽包蓋。

當(dāng)用鉀離子取代鈉離子時(shí),復(fù)合物會(huì)從溶液中有效地沉淀下來,離心除去變性劑后,就可以從上清中回收復(fù)性的質(zhì)粒 DNA。


質(zhì)粒提取實(shí)驗(yàn)會(huì)遇到的問題

1.?未提出質(zhì)粒或提取質(zhì)粒得率低


1)提取質(zhì)粒的甘油菌使用錯(cuò)誤對(duì)應(yīng)抗性的培養(yǎng)基培養(yǎng)

2)菌體質(zhì)??截悢?shù)低或無質(zhì)粒,菌質(zhì)??截悢?shù)低往往提取的質(zhì)粒含量低,某些菌體在多次轉(zhuǎn)接后可能出現(xiàn)質(zhì)粒丟失的情況3)堿裂解時(shí)間不充分,導(dǎo)致裂解不徹底,菌體中質(zhì)粒未全部提取


2.?基因組污染或蛋白質(zhì)

1)加入裂解液時(shí)搖晃劇烈及裂解時(shí)間過長(zhǎng),菌體基因組未與菌體蛋白質(zhì),細(xì)胞壁相互纏繞形成復(fù)合物并與十二烷基硫酸鹽結(jié)合成沉淀

2)離心白色絮狀物時(shí)間不充分,導(dǎo)致上清液并不澄清混有蛋白質(zhì)

3)不要使用過多菌體,導(dǎo)致上清液不夠澄清


3.質(zhì)粒降解

1)質(zhì)粒提取完成后避免反復(fù)凍融

2) ?質(zhì)粒溶解時(shí)吹打混勻時(shí)避免吹打過力,造成機(jī)械損傷

3)最后溶解質(zhì)粒時(shí)應(yīng)在超凈工作臺(tái)避免引入核酸酶造成質(zhì)粒降解

以上就是小海星為大家準(zhǔn)備的質(zhì)粒提取避坑指南,希望對(duì)大家的實(shí)驗(yàn)有所幫助。關(guān)注小海星,實(shí)驗(yàn)不重新。

作者:海星生物

公眾號(hào):Cas9X細(xì)胞基因編輯

以上內(nèi)容由海星生物(http://www.cas9x.com)提供

服務(wù)內(nèi)容:CRISPR/Cas9細(xì)胞基因編輯 載體構(gòu)建/病毒包裝 PDO/動(dòng)物模型CDX 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株 干細(xì)胞/原代細(xì)胞 培養(yǎng)試劑盒

質(zhì)粒提取實(shí)驗(yàn)避坑指南的評(píng)論 (共 條)

分享到微博請(qǐng)遵守國(guó)家法律
曲沃县| 澎湖县| 昭平县| 庄河市| 永康市| 樟树市| 遂宁市| 社旗县| 磴口县| 东乌珠穆沁旗| 石渠县| 任丘市| 嫩江县| 天门市| 尼勒克县| 广德县| 大冶市| 中山市| 织金县| 秦安县| 灵台县| 志丹县| 应用必备| 东乡| 嘉峪关市| 广西| 台中市| 县级市| 巴南区| 响水县| 丹阳市| 潮安县| 新建县| 仁化县| 永靖县| 行唐县| 镇安县| 留坝县| 武鸣县| 鹤庆县| 沙湾县|