納米抗體是由比利時科學家于1993年在自然雜志中首次報道。傳統(tǒng)抗體分子(IgG)是由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈組成的結構比較保守的抗體分子?？贵w分子的輕鏈包含1個VL區(qū)和1個CL區(qū)，而重鏈則擁有1個VH區(qū)和3個CH區(qū)(CH1、CH2和CH3)。

羊駝只有重鏈抗體缺少輕鏈，由4個HC和2個VH組成，其中VHH區(qū)域又被稱為納米抗體或單域抗體（single domain antibody，sdAb），納米抗體（Nanobody, Nb）晶體為2.5nm，長4nm，分子量只有15KDa。納米抗體主要用于生物醫(yī)藥研發(fā)（基因工程藥物研發(fā)、ADC藥物研發(fā)）；用于臨床體外診斷（膠體金法、酶聯(lián)免疫吸附法、電化學發(fā)光法）；用于腫瘤研究、免疫學等基礎研究領域，目前CAR-T治療型抗體開發(fā)受到越來越多科研工作者的關注。

2.納米抗體的優(yōu)缺點

2.1 納米抗體的優(yōu)點

（1）在高溫和pH下的穩(wěn)定性；

（2）VHH可以識別通常不被常規(guī)抗體識別的抗原位點；

（3）它們的小分子片段有助于快速組織滲透和標記應用，包括跨越血腦屏障；

（4）用于大規(guī)模生產(chǎn)節(jié)約成本的替代品。

2.2納米抗體的缺點

納米抗體（VHH抗體）由于分子量較小，約為15kDa，相當于傳統(tǒng)IgG抗體重鏈或輕鏈的可變區(qū)，因此針對VHH抗體的二抗不具有普遍適用性，需要將VHH融合Fc片段進行共表達進行解決二抗識別問題（艾柏森生物提供多種抗羊駝二抗，可用于免疫血清效價檢測，Cat.#：SPAB01，SPAB03）

3.納米抗體（VHH抗體）主要應用方向

基于納米抗體優(yōu)良的性能，目前被廣泛應用于CAR-T治療型抗體開發(fā)。

CAR-T療法是嵌合抗原受體T細胞免疫療法，這是一種治療腫瘤的新型精準靶向療法。通過基因工程技術，將T細胞激活，并裝上定位導航裝置CAR（腫瘤嵌合抗原受體），將T細胞這個普通“戰(zhàn)士”改造成“超級戰(zhàn)士”，即CAR-T細胞，他利用其“定位導航裝置”CAR，專門識別并消滅體內(nèi)腫瘤細胞，從而達到腫瘤治療的目的。

4.艾柏森生物能夠為客戶提供高質量的駝源納米抗體開發(fā)服務

艾柏森生物可以提供多種駝源納米抗體開發(fā)服務，包括羊駝、大羊駝、駱駝、美洲駝等，基于噬菌體展示技術平臺，艾柏森生物可以提供包括抗原設計、羊駝免疫、文庫構建與篩選、活性功能驗證等主要實驗環(huán)節(jié)，并為全球的科學家提供高特異性和高親和力的羊駝VHH抗體。

5.艾柏森生物為客戶提供駝源抗體開發(fā)的全流程介紹

主要包括以下步驟:羊駝免疫，噬菌體文庫構建，抗體庫篩選，抗體表達與功能驗證。詳細流程如下:

5.1羊駝免疫

艾柏森生物提供健康的成年羊駝（28-36月大）進行免疫，約16-20周即可獲得高質量的文庫和單抗細胞株，交付完整的實驗過程記錄和免疫動態(tài)視頻。艾柏森生物根據(jù)客戶的抗原類型，會制定特定的免疫抗原制備方案以及免疫方案。

5.1.1抗原準備：客戶提供抗原，弗氏佐劑的使用量是1ml，將抗原和佐劑以1:1混合進行免疫。

5.1.2羊駝免疫:免疫5次，每次間隔20天，在羊駝頸部進行注射，免疫后1小時觀察羊駝是否有不適癥狀。

5.1.3采血：免疫前進行采血，留作陰性對照，在第三、第四次免疫后間隔一星期進行采血5ml效價測定，ELISA檢測血清效價，效價滿足要求＞105。艾柏森生物為客戶提供清晰的免疫時間節(jié)點信息表，如表1所示：

表1：艾柏森生物納米抗體制備免疫時間進程舉例

次數(shù)免疫日期第一次2020年11月25日第二次2020年12月16日第三次2021年1月6日第四次2021年1月27日第五次2021年2月18日

5.1.4PBMC細胞分離：取外周血100-120mL，PBMC細胞總數(shù)為4*107-108個，全部郵寄給客戶。

5.2噬菌體文庫構建

艾柏森生物使用M13噬菌體的pIII蛋白進行VHH抗體（納米抗體）表面展示，制備TG1電轉化感受態(tài)細胞，構建噬菌體載體，并進行噬菌體庫容測定。

5.2.1RNA提取：按照商業(yè)化試劑盒操作進行RNA提取。

5.2.2CDNA反轉錄合成：按照商業(yè)化試劑盒操作進行cDNA制備。

5.2.3PCR擴增：以cDNA為模板，PCR擴增重鏈抗體基因可變區(qū)，擴增2輪。

5.2.4連接載體并電轉化：酶切、連接噬菌粒載體，電擊轉化TG1宿主菌，構建抗體庫。

5.2.5細菌文庫/噬菌體文庫建立：計算庫容量，庫容量交付標準108～109。

5.3抗體庫篩選

常規(guī)使用的篩選方法是固相篩選，磁珠和細胞篩選（常用于GPCR，離子通道受體的抗體篩選）。

艾柏森生物為客戶提供定制化的篩選體系，根據(jù)客戶的需求不同，我們提供固相篩選，固相/液相篩選以及細胞篩選的方法。前兩者適用于蛋白，多肽一類靶抗原的篩選；第三種適用于GPCR，離子通道受體的抗體篩選。通過不同的篩選方法，可以為客戶高效的篩選出不同類型的阻斷型抗體

5.4抗體表達與功能驗證

5.4.1表達：構建哺乳表達體系進行抗體表達，艾柏森建立了完善的哺乳表達體系，包括但不限于FreeStyle 293-F cell line和Expi CHO-S等細胞系，配合艾柏森設計的高表達載體（含有全長的CMV啟動子以及優(yōu)化后的分泌信號肽序列）進行重組抗體表達與制備。

5.4.2純化：納米抗體過鎳柱純化。

5.4.3親和力測定：將純化好的納米抗體進行Biacore親和力檢測。

艾柏森生物科技有限公司致力于基因、重組蛋白、抗體、噬菌體文庫等生物制劑的研發(fā)，并致力于為客戶提供一站式的CRO技術服務。

公司成立至今，以自主研發(fā)為核心，圍繞大量專業(yè)技術人才，先后搭建了蛋白表達純化平臺、抗體定制平臺、抗體工程平臺、抗體藥物平臺、質量分析平臺以及模式動物基因工程研究平臺。以抗體藥物研發(fā)一條鏈解決方案為基礎，我們主要為客戶提供重組蛋白表達生產(chǎn)、抗體制備、噬菌體庫構建與篩選，單克隆抗體藥物開發(fā)（抗體篩選、抗體測序、抗體分析、抗體人源化與親和力成熟、表位作圖、抗體工程改造與抗體藥效學）、穩(wěn)定細胞株構建與cGMP生產(chǎn)、細胞免疫（CAR-T/CAR-NK）、蛋白晶體學、蛋白質組學、生物信息學、藥理毒理學等技術服務。