chelex-100(作用、合成、溶液制備)
Chelex 100 是來(lái)自 Bio-Rad的螯合材料,用于通過(guò)離子交換純化其他化合物。值得注意的是其結(jié)合過(guò)渡金屬離子的能力。
它是一種含有亞氨基二乙酸基團(tuán)的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物。
通過(guò)用少量 2 M 硝酸洗脫樹(shù)脂獲得金屬的濃縮溶液,硝酸使亞氨基二乙酸酯基團(tuán)質(zhì)子化。
Chelex 樹(shù)脂通常用于 DNA 提取,通過(guò)與包括 Mg2+ 在內(nèi)的陽(yáng)離子結(jié)合來(lái)準(zhǔn)備聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),Mg2+ 是 DNA 酶的重要輔助因子。 Chelex 保護(hù)樣品免受煮沸后可能保持活性并隨后可能降解 DNA 的 DNA 酶的影響,使其不適合 PCR。煮沸后,Chelex-DNA 制劑穩(wěn)定,可在 4°C 下保存 3-4 個(gè)月。極性樹(shù)脂珠在打開(kāi)細(xì)胞后與極性細(xì)胞成分結(jié)合,而 DNA 和 RNA 則保留在 Chelex 樹(shù)脂上方的水溶液中。
然而,加熱步驟確實(shí)使雙螺旋變性,并且由此產(chǎn)生的單鏈 DNA 在儲(chǔ)存中不太穩(wěn)定。
Chelex 100 有什么作用?
Chelex 100 分子生物學(xué)級(jí)樹(shù)脂可用于從多種樣品類(lèi)型(包括細(xì)胞培養(yǎng)物、血液和組織)中快速、輕松地制備核酸。 使用 Chelex 100 制備的 DNA 和 RNA 適用于通過(guò) PCR、RT-PCR、ddPCR 或 LAMP 進(jìn)行檢測(cè)。
Chelex 樹(shù)脂通常用于 DNA 提取,通過(guò)與包括 Mg2+ 在內(nèi)的陽(yáng)離子結(jié)合來(lái)準(zhǔn)備聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),Mg2+ 是 DNA 酶的重要輔助因子。
Chelex 是由什么制成的?
Chelex 100 樹(shù)脂由含有配對(duì)亞氨基二乙酸根離子的苯乙烯二乙烯基苯共聚物制成,這些離子在結(jié)合多價(jià)金屬離子時(shí)充當(dāng)螯合基團(tuán)。
如何配制Chelex溶液?
將 9 g NaCl (mw 58.44) 溶解在干凈容器中的 700 ml 去離子水或蒸餾水中。
在室溫下儲(chǔ)存(3 個(gè)月)。
1.稱(chēng)出 1 g Chelex 100(100-200 目,來(lái)自 BioRad 的鈉形式)。
2.將 50 mM Tris 添加到干燥的 Chelex 中,制成 10 ml 溶液。
3.使用 4 N NaOH 將 pH 值調(diào)節(jié)至 11。