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PCR區(qū)分|PCR qPCR RT-PCR bPCR 長距離PCR

2023-09-12 15:56 作者:無錫耐思NEST  | 我要投稿


PCR(聚合酶鏈反應)是一種用于擴增特定DNA片段的技術。根據應用和設計,PCR可以分為多種類型,下面是其中一些常見的PCR類型及其區(qū)別:

1.標準PCR(常規(guī)PCR):標準PCR是最常見的PCR類型,它使用DNA模板、引物(前向和反向引物)和DNA聚合酶來擴增目標DNA片段。PCR循環(huán)包括變性、退火和延伸步驟。
通常使用DNA模板濃度為10-100 ng,引物濃度為0.2-0.5 μM,反應體系總體積為20-50 μL,反應溫度通常為94-98°C的變性,50-65°C的退火,以及72°C的延伸。反應周期數一般為25-35個。

2.實時定量PCR(qPCR):qPCR是一種可以實時監(jiān)測PCR反應進程的技術。它使用熒光探針或DNA結合染料來定量PCR產物的數量。qPCR可以提供準確的DNA定量和相對表達水平。
實時定量PCR(qPCR):通常使用DNA模板濃度為1-100 ng,引物和熒光探針的濃度為0.1-0.3 μM,反應體系總體積為10-25 μL,反應溫度通常為95°C的變性,50-65°C的退火,以及72°C的延伸。實時監(jiān)測PCR信號的周期數(Ct值)可以定量PCR產物的數量。

3.逆轉錄PCR(RT-PCR):RT-PCR是一種用于從RNA模板合成DNA的技術。它結合了逆轉錄和PCR步驟,用于研究基因表達和RNA病毒的檢測。
通常使用RNA模板濃度為10-1000 ng,逆轉錄酶的濃度為100-2000 U,引物濃度為0.2-0.5 μM,反應體系總體積為20-50 μL,逆轉錄溫度通常為42-55°C,變性溫度為94-98°C,退火溫度為50-65°C,延伸溫度為72°C。

4.數字PCR(dPCR):dPCR是一種用于精確測定DNA模板的絕對拷貝數的PCR技術。與qPCR不同,dPCR將PCR反應分成多個微小的反應區(qū)域,通過計數陽性和陰性反應來確定DNA的拷貝數。
通常使用DNA模板濃度為10-1000 ng,引物和探針的濃度為0.1-0.3 μM,反應體系總體積為10-25 μL,反應溫度通常為95°C的變性,50-65°C的退火,以及72°C的延伸。通過分割PCR反應體系,計數陽性和陰性反應來確定DNA拷貝數。

5.長距離PCR:長距離PCR用于擴增較長的DNA片段,通常超過5 kb。它需要特殊的引物設計和優(yōu)化的反應條件。

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