計(jì)算轉(zhuǎn)染效率的方法有哪些

使用不同類型的方法來計(jì)算轉(zhuǎn)染效率。

1. 報(bào)告系統(tǒng)

– 綠色熒光蛋白 （GFP） – GFP 天然存在于水母中。它用于通過同時(shí)轉(zhuǎn)染GFP基因和目的基因?qū)D(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行定性和定量分析。定性分析可以在熒光顯微鏡下進(jìn)行。定量分析可以通過流式細(xì)胞術(shù)完成。除GFP外，紅色熒光蛋白（RFP）和黃色熒光蛋白（YFP）也可用作報(bào)告基因。表達(dá)熒光蛋白的大腸桿菌菌落如圖1所示。

圖1：熒光蛋白

• 熒光素酶 – 熒光素酶天然存在于螢火蟲中，產(chǎn)生光。熒光素酶測定具有很高的靈敏度，可用于轉(zhuǎn)染DNA的定量分析。

• β-半乳糖苷酶 – β-半乳糖苷酶存在于大腸桿菌中。它用于用X-gal進(jìn)行的定性分析以及通過比色，熒光或化學(xué)發(fā)光方法進(jìn)行的定量分析。

• 分泌的堿性磷酸酶（SEAP） – SEAP是一種熱穩(wěn)定報(bào)告基因，在表達(dá)時(shí)由哺乳動(dòng)物細(xì)胞分泌。

2. 核酸標(biāo)記 – 熒光標(biāo)記的質(zhì)?？捎糜谵D(zhuǎn)染。然后可以在熒光顯微鏡下對(duì)它們進(jìn)行計(jì)數(shù)。

3. 蛋白質(zhì)印跡、免疫染色和其他功能測定

如何計(jì)算轉(zhuǎn)染效率

顯示報(bào)告基因的細(xì)胞數(shù)量和不顯示報(bào)告基因的細(xì)胞數(shù)量可以在顯微鏡下或通過流式細(xì)胞術(shù)計(jì)數(shù)。顯示報(bào)告基因的細(xì)胞百分比給出了轉(zhuǎn)染效率。

圖2：轉(zhuǎn)染效率