基因編輯原理

CRISPR/Cas9系統(tǒng)是一種原核生物的免疫系統(tǒng)，是細(xì)菌用來抵抗病毒和外源質(zhì)粒入侵的一種防御機(jī)制。目前最成熟且應(yīng)用最廣的是Type II的CRISPR/Cas9系統(tǒng)，其原理是利用gRNA特異性識(shí)別靶序列，并引導(dǎo)Cas9核酸內(nèi)切酶對(duì)靶序列的PAM上游進(jìn)行切割，從而造成靶位點(diǎn)DNA雙鏈斷裂，隨之利用細(xì)胞的非同源末端連接（NHEJ）或同源重組（HDR）的方式對(duì)切割位點(diǎn)進(jìn)行修復(fù)，實(shí)現(xiàn)DNA水平的敲除、敲入或點(diǎn)突變。

基因敲除方案

方案一

小片段敲除方案，gRNA設(shè)在外顯子2兩端的內(nèi)含子中，敲除外顯子編碼堿基數(shù)為非3倍數(shù)，敲除后可造成移碼。

方案二

移碼敲除方案，gRNA設(shè)在外顯子上，缺失的堿基數(shù)為非3倍數(shù)，敲除后可發(fā)生移碼突變。

方案三

大片段敲除方案，將整個(gè)基因的編碼序列敲除，達(dá)到大片段敲除的效果。

基因敲除載體分類

源井生物研發(fā)的基因敲除系列YKO載體，包括慢病毒載體、普通載體、腺相關(guān)病毒載體等，可廣泛應(yīng)用于體外或體內(nèi)研究。

單gRNA載體

單gRNA載體，可應(yīng)用于移碼或片段敲除的方案中，設(shè)計(jì)2-3個(gè)gRNA同時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞，可提高敲除效率，輕松實(shí)現(xiàn)基因敲除。

雙gRNA載體

雙gRNA載體，可應(yīng)用于大片段敲除的方案中，設(shè)計(jì)dual-gRNA構(gòu)建在一個(gè)載體上，轉(zhuǎn)染細(xì)胞，可大大提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。

質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)：提供載體酶切和測序驗(yàn)證報(bào)告。

基因編輯載體應(yīng)用：

針對(duì)不同基因編輯對(duì)象：不同類型細(xì)胞系，斑馬魚及大小鼠等。

針對(duì)不同基因編輯目的：移碼敲除，片段敲除，精確敲除，定點(diǎn)突變，片段敲入等，提供對(duì)應(yīng)的gRNA載體和打靶載體供客戶選擇。

注明 | 文章是源井生物原創(chuàng)，轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明。

關(guān)注公眾號(hào)“源井生物”，了解更多基因編輯相關(guān)資訊。