喵喵 | 1-3 微生物的培養(yǎng)（下）

知識(shí)點(diǎn)1??：微生物的純培養(yǎng)

1??微生物的純培養(yǎng)

（1）純培養(yǎng)物：由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物。

（2）純培養(yǎng)：獲得純培養(yǎng)物的過(guò)程就是純培養(yǎng)。

2??純培養(yǎng)的過(guò)程：配制培養(yǎng)基→滅菌→接種→分離→培養(yǎng)

【配制培養(yǎng)基】計(jì)算→稱量→溶化→調(diào)pH→定容→滅菌→倒平板

倒平板的具體操作步驟:

【平板劃線法】

是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。

在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見的子細(xì)胞群體，這就是菌落。

【提問(wèn)】如果5個(gè)區(qū)域，接種環(huán)應(yīng)該灼燒幾次？

6次【每次開始+做完實(shí)驗(yàn)之后】

【稀釋涂布平板法】

將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。

【培養(yǎng)】將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基（作對(duì)照）都倒置放入30-37℃恒溫箱中，培養(yǎng)12h和24h，分別觀察并記錄結(jié)果。（酵母菌28℃左右）

【提問(wèn)】為什么要導(dǎo)致培養(yǎng)？

1??防止水滴掉落沖散雜菌

2??防止污染培養(yǎng)基

【臨時(shí)保藏】

首先，將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長(zhǎng)成后，將試管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3~6個(gè)月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。

【甘油管藏】

在3mL的甘油管中，裝入1mL甘油后滅菌，將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混合后，放在-20℃的冷凍箱中保存。

知識(shí)點(diǎn)2??：微生物的技術(shù)

【活菌間接計(jì)數(shù)法】用稀釋涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目

a. 設(shè)置重復(fù)組，同一稀釋度重復(fù)對(duì)照平板不能少于3個(gè)，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)說(shuō)服力及準(zhǔn)確性。

b. 選擇菌落數(shù)在30~300之間適于計(jì)數(shù)的平板。

c. 該實(shí)驗(yàn)每克樣品中的菌株數(shù)=(C÷V) × M（C代表某一稀釋度下平板上的平均菌落數(shù)；V代表涂布平板時(shí)所有的稀釋液的體積；M代表稀釋倍數(shù))

d. 設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度、e. 統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。

【注意】稀釋倍數(shù)

細(xì)菌：10? 10? 10?

放線菌：103 10? 10?

真菌：102 103 10?