1. ? ? 抗原混合

1.1 ? ? 將抗原從-80℃冰箱中拿出，常溫溶解，避免反復凍融。做好標記。

1.2抽取抗原：根據(jù)抗原濃度抽取800μg，添加無菌超純水至體積1000μl，混勻，加入同體積弗氏佐劑1000μl，共2ml混合進行乳化。

2. ? ? 羊駝免疫和采血

2.1羊駝選擇：選擇健康強壯、精神狀態(tài)良好、體型適中的羊駝，挑選的羊駝毛色光亮，無受傷不適癥狀。挑選好動物，先預養(yǎng)1周左右以淘汰有些不合格的動物，使后期的實驗能順利進行。

2.2免疫：挑選好羊駝并確保動物適合，記錄耳號后開始免疫實驗。每次在羊駝頸部淋巴結附近分左右兩側注射，每側分2點注射，每點注射1ml乳化抗原。免疫后觀察30min確認羊駝狀態(tài)良好，無不適癥狀，每2周免疫一次。

2.3采血和血清分離：在每次免疫前進行采血用于免疫評價，采血從羊駝頸部靜脈采取，每次取5ml血液，3000rpm離心10min，分離保存上層血清。

3. ? ? 分離外周血單個核細胞（PBMC）

3.1 將離心機預溫至25℃，使用前關閉剎車；

3.2 在50ml離心管中分別加入15mlPBS和15ml新鮮血液進行稀釋，翻轉數(shù)次混勻；

3.3加15ml分離液于新50ml離心管中，向分離液管中加入稀釋好的血液，小心緩慢以防止血液和分離液混勻；

3.4500 g離心30min，觀察離心管中血液分離情況，用200μl移液器小心吸取出中間棉層免疫細胞至新的15ml離心管中，上層血清保存在新的離心管中，-80℃保存；

3.5 向單核細胞液中加入3倍體積PBS緩沖液混勻，400g離心15min；

3.6 去除上清液，每管加入3mlPBS緩沖液混勻并進行細胞計數(shù)，400g離心20min；

3.7去除上清液，根據(jù)細胞數(shù)目使用RNAiso Plus溶解分離得到的淋巴細胞108/mL溶解液，-80℃保存。