目前血清維生素D檢測方法主要為液相色譜-串聯(lián)質譜法（LC-MS/MS）和化學發(fā)光免疫分析（CLIA）。國家衛(wèi)生行業(yè)標準《WS/T 677—2020 人群維生素D缺乏篩查方法》推薦LC-MS/MS為第一方法，化學發(fā)光免疫法為第二檢測方法。從原理上看，LC-MS/MS是基于被測生物標志物本身分子量、結構等化學性質的直接分析方法，具有高靈敏度和高特異性。CLIA是基于抗原抗體反應，與LC-MS/MS相比，前處理簡單且檢測自動化程度高。

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LC-MS/MS

液相色譜串聯(lián)質譜法（LC-MS/MS）是臨床生化小分子檢測的首選方法，常用于血清25-羥維生素D（25-OH-VD）的檢測。LC-MS/MS結合了液相色譜（LC）的物理分離能力和質譜（MS）質量分析能力，可對未知化合物進行定性和定量分析。LC-MS/MS二級串聯(lián)質譜分析技術，可同時利用母離子及碎片離子信息，選擇性地監(jiān)測被定量的化合物，即使是痕量的組分也不受豐量物質的干擾。對于小分子分析測定來說，LC-MS/MS具有很高的分析特異性和和檢測靈敏度。

美中不足的是，LC-MS/MS分析結果易受樣本中目標分析物以外的物質（包括來源于樣本自身及方法建立過程中外部環(huán)境引入的物質）影響。為消除這種基質效應，提高LC-MS/MS分析結果的準確性，樣品需要進行嚴格的前處理。對與尿液、口腔液、血漿等不同臨床驗本中的小分子進行檢測時，需要根據(jù)基質凈化效果、樣品預期濃度、最低檢出限要求等因素選擇不同的前處理方式，以消除不同物質帶來的基質效應。

化學發(fā)光競爭免疫檢測

與LC-MS/MS相比，基于抗原-抗體特異性結合的免疫檢測技術操作簡單、檢測快速，是VD小分子質譜檢測切實可行的替代方法。由于25-OH-VD分子量小，缺乏抗原表位，目前臨床化學發(fā)光免疫檢測普遍采用的是競爭法。競爭法屬于試劑有限型分析，檢測靈敏度相對較低；交叉反應率較高，易出現(xiàn)假陽；在痕量檢測時難以與陰性樣本區(qū)分，在樣本低濃度范圍會產生較大的誤差。大量研究顯示，VD競爭法與質譜檢測結果的相關性較差，盡管有化學發(fā)光的加持，檢測結果也不盡如人意。

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中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)院檢驗科與中日友好醫(yī)院檢驗科血凝室的研究人員液相色譜串聯(lián)質譜法（LC-MS/MS）方法作為參照標準，比較了雅培、索林、IDS、羅氏、西門子5個廠家的自動化免疫學方法和測定25-OH-VD結果的一致性，結果顯示不同檢測系統(tǒng)檢測結果相差較大（見表1）。

表1.免疫學方法與LC-MS/MS臨床判定一致性

小分子非競爭免疫檢測技術與質譜相關性高達0.94

為解決免疫檢測技術在小分子臨床應用的技術難題，提高免疫檢測與質譜檢測結果的一致性，OKAYBIO研發(fā)團隊不斷實踐、反復嘗試，最終通過調整免疫策略、優(yōu)化抗體設計，成功開發(fā)出適用于小分子非競爭免疫分析的抗體。