你的Western Blot結(jié)果是否出現(xiàn)過非特異性條帶？條帶變窄變寬了？條帶哭了條帶笑了？信號太弱了？等情況，所以現(xiàn)在需要提升一下你的Western Blot結(jié)果的顏值了！

如何使電泳條帶漂亮些？

電泳注意事項

●為減少小蛋白條帶的擴散，上樣后應盡快開始電泳?

●如用預染Marker，當要分辨的蛋白到達最佳分辨區(qū)——分離膠的2/3處 ，結(jié)束電泳

●電泳用恒壓模式能保持蛋白質(zhì)恒定的電泳遷移率，而電壓先低后高可使樣品更好的進入凝膠。實際電壓可根據(jù)時間安排調(diào)節(jié)，電壓高時電泳發(fā)熱大，電壓低于50V時小蛋白容易彌散，凝膠分辨率會下降。

影響跑膠的質(zhì)量，有以下因素：

●?膠的均勻度，膠越均勻，條帶越窄，分離越均勻。? 倒膠之前，一定要充分混勻，玻璃板一定要干凈，水或飽和正丁醇隔離時，一定要比較輕地加上去，避免稀釋下層的分離膠，使膠不均勻。

●?聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝膠的分辨率。建議做法：待凝膠在室溫凝固后，可在室溫下放置一段時間使用。

●?電壓，小的電壓會使膠的分子篩效應得到充分發(fā)揮。? 電壓越小，條帶越漂亮，濃縮膠80v，分離膠100v就能跑得很好。

●?樣品，在加樣前離心，增加一些增溶輔助試劑如尿素，可以克服由于樣品溶解不佳引起的紋理和拖尾現(xiàn)象 。

●?減少上樣量可以避免由于加樣量太多引起蛋白帶過寬或與鄰近泳道的蛋白帶相連。

WB常見問題分析

高背景

信號弱或無信號

非特異性條帶

其他

● 條帶出現(xiàn)微笑的上揚形狀，表示膠沒有混勻或者電泳時散熱不均勻，電壓過高，緩沖液濃度過高。

● 垂直條紋，表示上樣量過多或者樣品有沉淀。

● 條帶變窄，說明鹽濃度過高，需脫鹽; 凝膠不均勻，梳子沒拔好。

● 條帶變寬，說明電泳前樣品擴散，故加樣操作要快。

● 兩個條帶，說明蛋白沒有完全還原，或又重新氧化，需配置新鮮緩沖液。