1、實(shí)驗(yàn)原理

Western免疫印跡，是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)的方法。對(duì)已知表達(dá)蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)新基因的表達(dá)產(chǎn)物，可通過(guò)融合部分的抗體檢測(cè)。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，探針是抗體，顯色用標(biāo)記的二抗。??經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。

2、實(shí)驗(yàn)流程

3、應(yīng)用

（1）從蛋白質(zhì)混合物中檢出目標(biāo)蛋白質(zhì)；

（2）定量或定性確定細(xì)胞或組織中蛋白質(zhì)的表達(dá)情況；

（3）用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用后續(xù)分析。

4、實(shí)驗(yàn)周期及交付結(jié)果形式

（1）12個(gè)工作日內(nèi)

（2）黑白顯色圖(帶Marker)、內(nèi)參、灰度值分析、柱狀圖、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

5、報(bào)告部分實(shí)驗(yàn)圖