冠狀病毒所到之處無(wú)不令人聞風(fēng)喪膽，咳咳咳~可能過(guò)了一點(diǎn)，不過(guò)，草木皆兵，驚弓之鳥這些詞也是沒(méi)跑了。舉個(gè)例子，你突然感到頭暈惡心想吐，或者咳嗽的厲害，再配合體溫表一看，38.3°，然后你不會(huì)懷疑世界，你只會(huì)懷疑自己是不是感染了新-冠...

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事實(shí)上，這不是你，或者一小撮人的經(jīng)歷，人都是吃五谷雜糧長(zhǎng)大的，偶爾感個(gè)冒發(fā)個(gè)燒也挺正常的，以至于在新-冠突然風(fēng)靡全-球以后，很多人出現(xiàn)了Covid-19的體征和癥狀，不過(guò)檢測(cè)結(jié)果呈陰性，即使沒(méi)有出現(xiàn)在確診數(shù)據(jù)中，也還是可怕的，你有沒(méi)有想過(guò)，問(wèn)題或許出現(xiàn)在檢測(cè)上。

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那么接下來(lái)，如果有一種比現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)方法更準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，那可就太好了。

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COVID-19假陰性：

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假陰性是研究人員和臨床醫(yī)生在使用當(dāng)前標(biāo)準(zhǔn)的SARS-CoV-2病毒RNA提取方法時(shí)面臨的zui大挑戰(zhàn)之一。

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通過(guò)鼻咽拭子或其它樣本采集方法采集到樣本后，將其存儲(chǔ)在病毒運(yùn)輸介質(zhì)（VTM）或通用運(yùn)輸介質(zhì)（UTM）中。這就是挑戰(zhàn)的開始。培養(yǎng)基常常不能有效地保存病毒RNA，因?yàn)樗荒茉谑覝叵路€(wěn)定臨床樣本中的病毒RNA長(zhǎng)達(dá)3天。這導(dǎo)致病毒RNA的快速降解/碎片化。此外，對(duì)于安全處理，VTM/UTM不能使樣品無(wú)傳染性。

病毒RNA碎片化為何那么重要？目前的RNA提取標(biāo)準(zhǔn)（基于二氧化硅磁珠的技術(shù)）不能有效地捕獲高度片段化的RNA。這是由于基于二氧化硅的技術(shù)傾向于結(jié)合更大的RNA序列。如果未完全捕獲片段化的病毒RNA，則在基于qRT-PCR的檢測(cè)中產(chǎn)生假陰性COVID-19結(jié)果的可能性將大大提高。

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COVID-19 RNA提取方法的比較研究：

這與COVID-19標(biāo)準(zhǔn)化工作流程中的病毒RNA提取方法不一致，因此Norgen團(tuán)隊(duì)進(jìn)行了一項(xiàng)研究，將Norgen的提取方法與基于二氧化硅磁珠的技術(shù)進(jìn)行了比較。目的是確定在捕獲SARS-CoV-2片段化病毒RNA的敏感性方面，不同的RNA提取方法是否存在差異。從Boca Biolistics（FL, USA）采購(gòu)了44份臨床鼻咽拭子樣本。使用FDA / EUA批準(zhǔn)的PerkinElmer?SARS-CoV-2實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)方法，對(duì)樣本進(jìn)行預(yù)篩選，確認(rèn)44份樣本為SARS-CoV-2陽(yáng)性。

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二氧化硅OR碳化硅？

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研究了兩種RNA提取方法在檢測(cè)上述44種臨床樣品中檢測(cè)SARS-CoV-2病毒RNA的準(zhǔn)確性方面的效率。

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種方法是提取病毒RNAzui常用的方法，傳統(tǒng)的基于二氧化硅磁珠的技術(shù)（Zymo Research的Quick-DNA / RNA Viral MagBead）提取病毒RNA。第二種方法是基于碳化硅的提取方法（Norgen唾液/拭子RNA純化試劑盒）。

什么是zui佳的RNA純化技術(shù)？

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到這里事情逐漸變得有趣起來(lái)。使用這兩種方法提取RNA，并使用Norgen的2019-nCoV TaqMan RT-PCR Kit（Cat.?TM67100）進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)，針對(duì)CDC推薦的3個(gè)基因（N1、N2和RP）。

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當(dāng)比較兩種方法的qRT-PCR數(shù)據(jù)時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)基于二氧化硅磁珠的提取方法對(duì)SARS-CoV-2真陽(yáng)性樣本的假陰性率為25％。在另一方面中，和基于二氧化硅磁珠的方法相比，基于碳化硅的提取方法產(chǎn)生了對(duì)SARS-CoV-2樣本的100％的真陽(yáng)性率和更一致的Ct值。這些結(jié)果清楚地表明假陰性結(jié)果可以通過(guò)使用基于Norgen碳化硅（SiC）的技術(shù)而不是傳統(tǒng)的基于二氧化硅的技術(shù)來(lái)進(jìn)行避免。

如何改進(jìn)COVID-19檢測(cè)中RNA提取流程？

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碳化硅是一種新型的RNA提取技術(shù)，具有出色的RNA結(jié)合親和力——特別是對(duì)小的、高度降解的RNA片段，如病毒RNA。碳化硅對(duì)所有RNA序列具有一致的結(jié)合親和力，對(duì)GC的含量或大小沒(méi)有偏見。此外，碳化硅不需要任何載體RNA或諸如苯酚/氯仿之類的有害化學(xué)物質(zhì)。

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這意味著什么？

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檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室必須使用zui準(zhǔn)確的技術(shù)，以確?？煽繄?bào)告SARS-CoV-2病毒感染情況?；跇?biāo)準(zhǔn)二氧化硅磁珠的提取方法可能不是檢測(cè)SARS-CoV-2zui準(zhǔn)確的方法，正如在研究中看到的，假陰性率為25%。

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現(xiàn)在是對(duì)整個(gè)篩查工作流程的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估的時(shí)候了——從采集生物樣本，到病毒RNA提取，再到SARS-CoV-2檢測(cè)——以zui終保護(hù)全球人口的健康和安全。

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文章來(lái)源：https://www.amyjet.com/featured/sars-cov-2-rna.shtml