Fluo-4 AM,鈣熒光探針是一種常用的檢測細(xì)胞內(nèi) Ca2+?濃度的探針。Fluo-4 AM is a cell-permeable, fluorescent Ca2+?indicator (Kd?Ca2+?= 345 nM). Displays no resting signal and 100-fold increase in emission intensity upon Ca2+?binding. Excitation/emission λ 494/506 nm.

Fluo-4 AM實(shí)驗(yàn)步驟：
1、所需試劑：
※ 2 mM的 Fluo-4, AM（DMSO）試劑溶液，將1mg的Fluo-4, AM溶進(jìn)442μL的DMSO中；
※ Pluronic F127； Hanks balanced salt solution（HBSS）
※ HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl2，0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4）
2、實(shí)驗(yàn)步驟：
※ 向Fluo-4, AM/DMSO溶液中加入16.5mg的Pluronic F127，Pluronic F127可以防止 Fluo-4, AM在HBSS緩沖液中聚合，同時(shí)可以幫助其進(jìn)入細(xì)胞；
※ 用 HBSS緩沖液 稀釋 Fluo-4, AM溶液，制備出 4μM的Fluo-4, AM溶液；
※?將制備好的Fluo-4, AM溶液加入細(xì)胞中，在37℃條件下培養(yǎng)約20分鐘；
※ 加5倍體積且含有 1%胎牛血清 的HBSS緩沖液后，繼續(xù)培養(yǎng)月40分鐘；
※ 用 HEPES buffer saline進(jìn)行洗滌細(xì)胞3次后，再用 HEPES buffer saline使細(xì)胞重懸浮，制備成 1×105 cells/mL溶液。
※ 37℃條件下培養(yǎng)約10分鐘，再該細(xì)胞進(jìn)行熒光鈣離子的檢測。熒光波長：激發(fā)波長494nm，發(fā)射波長516nm。