大豆胰蛋白酶抑制因子檢測主要是檢測發(fā)酵豆粕，今天為大家介紹大豆胰蛋白酶抑制因子檢測的詳細步驟

第一步：試劑盒復溫 因為大豆胰蛋白酶抑制因子檢測試劑盒儲藏有要求，需要在2-8℃干燥保存，一般都是在冰箱中儲藏，使用前需要提前取出恢復到室內溫度。

第二步：樣本提取工作液、洗滌工作液配置

1、根據(jù)使用用量取試劑盒中的30x濃縮樣本提取液，按照1:29的體積比例，用蒸餾水稀釋到工作濃度，混勻，該工作液為樣本提取液，提取樣本時使用。
2、根據(jù)使用用量取試劑盒中的20x濃縮洗液，按照1:19的體積比例，用蒸餾水稀釋到工作濃度，混勻，該工作液為洗滌工作液，提取洗板時使用。

第三步：樣本稱量 取代表性的樣本粉碎成可以過60目篩以上的顆粒，稱取0.3克樣本。稱量允許誤差為0.0003克

第四步：提取 將稱量好的樣本倒入50ml離心管中，加入30ml 1X提取工作液，37℃水浴震蕩提取1小時，注意轉速大于200rpm。提取樣本不可以過夜使用，既現(xiàn)提現(xiàn)用。

第五步：離心 4000rpm離心機離心5分鐘

第六步：稀釋 取離心后的上清液100μl 加入600μl蒸餾水混勻，再取100μl混合液加入900μl蒸餾水混勻待測

第七步：加樣 取適量的檢測板條，加入校準品、50μl待測樣本，并記錄其中的位置，再向每孔中加入抗體工作液50μl，拍板1分鐘，然后蓋上蓋板膜37℃孵育9分鐘

第八步：洗板 孵育結束后甩掉微孔中的溶液，注滿1x洗滌工作液。重復洗滌4次。于吸水紙上拍干。

第九步：加酶 在微孔中各加入10μl酶標試劑，蓋上蓋板膜，37℃孵育10分鐘

第十步：洗板 孵育結束后甩掉微孔中的溶液，注滿1x洗滌工作液。重復洗滌4次。于吸水紙上拍干。

第十一步：顯色 每微孔中加入顯色液100μl，蓋上蓋板膜，37℃避光孵育10分鐘。

第十二步：終止讀數(shù) 每微孔中加入100μl終止液，立即與450/630nm雙波長下讀取吸光度值。 到此整個大豆胰蛋白酶抑制因子檢測已經(jīng)完成。

發(fā)酵豆粕中大豆胰蛋白酶抑制因子的含量，可以直觀的體現(xiàn)出發(fā)酵豆粕中抗營養(yǎng)因子的鈍化情況，當然了大豆抗營養(yǎng)因子除了包含大豆胰蛋白酶抑制因子，還包括大豆凝集素、大豆球帶白（大豆11s蛋白）、β-伴大豆球蛋白（大豆7s蛋白）以及大豆凝集素（SBA），如果要判定發(fā)酵豆粕工藝是否完善，這些大豆抗營養(yǎng)因子都需要進行檢測